类大麦属物种高分子量谷蛋白基因的鉴定与分离

论文摘要

类大麦属作为小麦族中较为少见的单种属,主要研究集中在系统进化方面,而对其高分子量谷蛋白的研究尚未见报道。为了深入了解类大麦属物种高分子量谷蛋白及其编码基因,对类大麦属材料毛节草（Crithopsis delileana）的谷蛋白亚基进行了分析、鉴定,并对其高分子量谷蛋白编码基因进行了克隆、测序和表达分析,所获主要结果如下: 1.高分子量谷蛋白亚基组成分析 利用SDS-PAGE检测了2份来自于丹麦的毛节草种子高分子量谷蛋白亚基组成。结果表明,利用普通提取方法,2份材料在小麦的高分子量谷蛋白区域均仅有一条带,电泳迁移率介于普通小麦By8和Dy10亚基之间,推测为一个高分子量谷蛋白亚基。在普通小麦的低分子量谷蛋白区域,还出现了一条染色强度相当的带。通过丙酮沉淀法提取分析,发现只有电泳迁移率介于普通小麦By8和Dy10亚基之间的带存在,初步确认毛节草中只有一种高分子量谷蛋白亚基。 2.高分子量谷蛋白亚基基因Kx和Ky分离克隆 利用高分子量谷蛋白亚基特异性引物,对1份毛节草材料的基因组DNA进行扩增得到两个长度分别为2.1和1.7kb的片段,经过序列分析表明2.1kb片段为Kx亚基编码基因,而1.7kb片段为Ky亚基（未表达）的编码基因。Genebank登录号分别为AY804128和AY834230。

论文目录

• 1 文献综述
• 1.1 类大麦属（Crithopsis）物种研究现状
• 1.2 HMW-GS的基因定位及遗传多样性
• 1.3 小麦近缘野生属种的HMW-GS变异类型及研究现状
• 1.4 高分子量谷蛋白亚基等位变异与品质的关系
• 1.5 PCR技术在鉴定HMW-GS中的应用
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 谷蛋白的提取
• 2.2.1.1 普通提取法
• 2.2.1.2 选择性沉淀法
• 2.2.1.3 丙酮沉淀法
• 2.2.2 SDS-PAGE分析
• 2.2.3 基因组DNA提取
• 2.2.4 基因组DNA的PCR扩增
• 2.2.5 PCR产物T-载体克隆
• 2.2.6 热击感受态的制备
• 2.2.7 转化大肠杆菌
• 2.2.8 阳性克隆筛选
• 2.2.9 定向缺失制备亚克隆
• 2.2.10 DNA序列测定与分析
• 2.2.11 克隆基因的体外表达
• 3 结果与分析
• 3.1 SDS-PAGE分析
• 3.1.1 普通提取法的SDS-PAGE分析
• 3.1.2 选择性沉淀法的SDS-PAGE分析
• 3.1.3 丙酮沉淀法的SDS-PAGE分析
• 3.2 克隆及序列分析
• 3.2.1 PCR扩增及克隆
• 3.2.2 序列分析与比较
• 3.2.3 Kx亚基的体外表达
• 3.3.4 进化分析
• 4 讨论
• 4.1 小麦野生近缘属物种HMW-GS基因的分离
• 4.2 高分子量谷蛋白的特异提取
• 4.3 Ky基因的沉默
• 4.4 Kx亚基的电泳迁移率
• 4.5 HMW-GS基因的定位
• 4.6 HMW-GS对于品质的贡献
• 5 结语
• 参考文献
• 致谢
• 在读期间发表文章