腺病毒介导的小鼠Flt3-L基因治疗G422胶质母细胞瘤的实验研究

腺病毒介导的小鼠Flt3-L基因治疗G422胶质母细胞瘤的实验研究

论文摘要

目的:研究Flt3-L基因对G422胶质母细胞瘤的治疗作用。 方法:本研究采用重组腺病毒介导的小鼠Flt3-L基因治疗小鼠G422胶质母细胞瘤。通过腺病毒介导的绿色荧光蛋白基因(Ad-GFP)转染G422细胞观察腺病毒转染效果。重组腺病毒携带的Flt3-L基因通过RT-PCR、Western-blot检测Flt3-L蛋白的表达。携有Flt3-L基因的重组腺病毒体外转染G422细胞,通过四唑盐比色试验(MTT法)测量转染后G422细胞的增殖情况。 结果:当重复感染度(MOI)=100时,重组腺病毒介导的绿色荧光蛋白基因(Ad-GFP)在转染G422细胞36小时后,绝大多数细胞呈现绿色荧光,转染效率达到90%以上。转染后的细胞裂解后做RT-PCR试验,结果显示Ad-Flt3-L组在700bp与600bp标准DNA之间出现一条高亮度的约620bp左右的条带,而对照组没有。Ad-Flt3-L转染G422细胞后,在培养细胞的上清液中用Western-blot法检测到了高水平的Flt3-L蛋白的表达。MTT法测量G422细胞在Ad-Flt3-L处理后的增殖情况,结果在Ad-Flt3-L转染后G422细胞生长正常。 结论:腺病毒携带的Flt3-L基因对G422细胞的正常分化和增殖没有明确的影响。

论文目录

  • 引言
  • 第一章 Ad-Flt3-L和Ad-GFP的扩增、纯化、浓缩和病毒滴度测定
  • 第二章 G422小鼠胶质母细胞瘤细胞的分离、培养和冻存
  • 第三章 腺病毒对G422细胞的体外转染效率
  • 第四章 Rt-PCR检测Ad-Flt3-L转染G422细胞后mRNA表达
  • 第五章 Western blot试验检测G422细胞Flt3-L的蛋白质表达
  • 第六章 ELISA检测G422细胞Flt3-L蛋白质的表达量
  • 第七章 转染Ad-Flt3-L后对G422细胞增殖的影响
  • 讨论
  • 结论
  • 附图
  • 参考文献
  • 综述
  • 参考文献
  • 附录
  • 攻读学位期间的研究成果
  • 致谢
  • 学位论文独创性声明、学位论文知识产权权属声明
  • 相关论文文献

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