胃癌中CD4～+CD25～+调节性T细胞的免疫抑制调节作用及其机理的实验研究

论文摘要

目的:研究胃癌患者（实验组）和正常人（对照组）外周血中T淋巴细胞尤其是CD4+CD25+T细胞（CD4+CD25+ Regulatory T cells, Treg）水平的差异,从而探讨在胃癌肿瘤免疫过程中Treg细胞对免疫效应细胞以及树突状细胞（Dendritic Cells, DC）的抑制/调节作用。同时,进一步观察Foxp3（Forkhead box P3, Foxp3）基因在Treg细胞中的表达水平以探讨其对Treg细胞的调节作用。方法:应用流式细胞术（Flow Cytometry,FCM）测定实验组患者术前外周血中T淋巴细胞及Treg细胞含量的改变;对外周血中DC细胞进行体外培养活化,检测其表面分子CD80、CD83的表达情况;应用免疫磁珠法,在培养前祛除外周血单状核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cell, PBMCs）中的Treg细胞,以负载抗原的DC激活扩增制备抗原特异性细胞毒T淋巴细胞（Cytotoxic T Lymphocyte , CTLs）,以胃癌BGC-823细胞作为靶细胞（效靶比=20:1）观察祛除Treg细胞前后CTLs肿瘤杀伤效应的差异;采用RT-PCR技术检测FoxP3基因在胃癌患者外周血Treg细胞中的表达及其与对照组的差异。结果:1、流式结果:胃癌患者外周血中T淋巴细胞（CD3+T）及杀伤性T细胞（CD8+T）总数,与健康对照组相比无明显统计学差异;诱导辅助性T细胞（CD4+T）总数较健康对照组明显降低（t=2.636,P<0.05）,而Treg细胞占CD4+T细胞总数的（12.76±0.46）%,显著高于健康对照组的（6.81±0.66）%（t=7.441,P<0.01）。2、胃癌患者外周血中DC表面分子表达变化:胃癌组外周血DC表面分子CD80、CD83的表达分别为（59.95±1.01）%和（48.66±1.27）%,其对照组中表达分别为（75. 04±0.60）%和（75.68±0.58）%。表面分子CD80、CD83在胃癌患者外周血DC表面表达较对照组显著下降〔（tCD80=12.90,P<0.01）;（tCD83=19.43,P<0.01）〕。3、胃癌患者外周血中Treg细胞与DC表型相关性:将胃癌患者外周血中Treg细胞与DC表面分子CD80、CD83表达进行相关性分析,结果提示外周血Treg细胞在胃癌患者外周血CD4+T中所占的比例与DC细胞表面分子CD80、CD83的表达密切相关〔（rCD80=0.603,P<0.01）; （rCD83=0.463,P<0.05）〕。4、经不同处理后的CTLs对BGC-823胃癌细胞的杀伤率:实验组和对照组CTLs对胃癌细胞都有杀伤作用,杀伤效率分别为（28.45±2.89）%和（16.29±3.04）%,实验组杀伤效率明显高于对照组（t=2.898,P<0.01 ）。5、RT-PCR结果:FoxP3基因在胃癌患者外周血Treg细胞中呈现高表达（0.84±0.02）%,明显高于健康对照组的（0.76±0.03）%（t=2.229, P<0.05）。结论:1.胃癌患者外周血中辅助性T细胞数量下降,而Treg细胞的数量较正常人明显增高,提示Treg细胞在肿瘤患者的自身肿瘤免疫监视中发挥着重要作用。2.胃癌患者外周血中DC表面分子CD80、CD83表达明显降低,并且同外周血中Treg细胞表达有明显相关性,提示Treg细胞可能同时参与对DC细胞功能的抑制性调节。3.祛除外周血中Treg细胞后,在体外活化的免疫细胞其免疫功能增强,致敏的CTLs免疫杀伤能力明显提高,提示Treg细胞可能直接或间接参与肿瘤患者体内的肿瘤免疫耐受和免疫逃避。4.胃癌患者外周血的Treg细胞中FoxP3基因呈现高表达,提示FoxP3基因可能与Treg细胞的抑制/调节功能直接相关。FoxP3基因高表达增强了Treg细胞抑制功能,通过对Treg细胞的调控可能实现高效率的临床肿瘤免疫治疗。

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