海洋厌氧细菌SRB-22菌株代谢产物研究

论文摘要

随着抗生素及其他抗菌药物的广泛应用,病原微生物的耐药问题日趋严重,因此开发新型抗生素迫在眉睫。陆地微生物曾是寻找抗生素的主要来源,但近年来从陆地微生物中发现新抗生素的几率越来越低,人们必须寻找新的药源。海洋环境的特殊性使海洋微生物具有独特的遗传背景与代谢途径,可能产生结构新颖、作用独特的代谢产物,成为筛选新型抗生素的重要来源。本论文对分离自大连黑石礁海域海水样品的一株具有抗菌活性的硫酸盐还原细菌SRB-22菌株进行了研究,考察了SRB-22菌株的最佳发酵条件和活性代谢产物的稳定性,提取分离了2个紫外吸收明显的代谢产物并进行了光谱分析和结构解析。主要研究结果如下:对SRB-22菌株产活性物质的最佳培养条件进行了考察,确定最佳培养条件为:初始pH为7.2,培养温度25℃～30℃,接种量10%,培养时间28d。对SRB-22菌株代谢产物稳定性进行了初步考察,结果表明代谢产物有较强的光稳定性和热稳定性,4℃长时间放置也较稳定,但强酸强碱条件下不稳定。经过正相硅胶柱层析、凝胶柱层析、反相硅胶柱层析及反相HPLC制备层析,得到两个较纯化合物,其中化合物D-1通过对其核磁共振谱、质谱的解析,再与有关文献报道的数据进行比较,确定该化合物为胸腺嘧啶。化合物D-2由于纯度不够,主要成分的质谱、一维、二维核磁共振谱给出有用信息较少,最终未能鉴定其结构。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 绪论
• 一、立题背景及意义
• 二、海洋微生物概况
• 三、活性代谢产物国内外研究进展
• 四、海洋厌氧微生物的研究
• 五、海洋生物活性物质的研究方法
• 六、课题研究内容
• 第一章 目的菌株的选择
• 1.1 材料与设备
• 1.1.1 实验仪器及设备
• 1.1.2 实验药品与试剂
• 1.1.3 实验材料
• 1.1.4 培养基的配制及其注意事项
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 菌株的培养
• 1.2.2 代谢产物的粗提
• 1.2.3 抗菌活性比较
• 1.2.4 指纹图谱比较
• 1.3 实验结果与分析
• 1.3.1 抑菌活性比较
• 1.3.2 指纹图谱比较
• 1.4 讨论
• 本章小结
• 第二章 发酵条件的优化及代谢产物稳定性初步研究
• 2.1 材料与设备
• 2.1.1 实验仪器及设备
• 2.1.2 实验药品与试剂
• 2.1.3 实验材料
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 活性部位的确定
• 2.2.2 最佳发酵条件的考察
• 2.2.3 活性物质稳定性初步研究
• 2.3 实验结果与分析
• 2.3.1 活性部位的确定
• 2.3.2 最佳培养条件的考察
• 2.3.3 活性物质稳定性考察结果
• 本章小结
• 第三章 代谢产物的分离纯化及结构鉴定
• 3.1 材料与设备
• 3.1.1 实验仪器及设备
• 3.1.2 实验药品与试剂
• 3.1.3 实验材料
• 3.1.4 显色剂配方
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 菌株扩大培养
• 3.2.2 代谢产物粗提及抗菌活性测定
• 3.2.3 活性跟踪
• 3.2.4 分离条件的探索
• 3.2.5 制备板层析活性跟踪
• 3.2.6 正相硅胶柱层析初步分离代谢产物
• 3.2.7 反相柱层析
• 3.2.8 凝胶柱层析
• 3.2.9 HPLC分析及制备
• 3.3 实验结果与分析
• 3.3.1 粗提物质量及抗菌活性
• 3.3.2 薄层层析结果
• 3.3.3 正相硅胶柱层析
• 3.3.4 正-4组分反相柱层析
• 3.3.5 正-8组分凝胶柱层析
• 3.3.6 HPLC分析及制备
• 3.3.7 化合物纯度分析
• 3.3.8 化合物结构鉴定
• 3.4 讨论
• 本章小结
• 结论与展望
• 参考文献
• 附录A 部分谱图
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文
• 致谢