猪肌生成抑制素功能区编码基因的原核表达及纯化

猪肌生成抑制素功能区编码基因的原核表达及纯化

论文摘要

肌生成抑制素是骨骼肌生长、分化的负调控因子,它的相关研究在畜牧生产、动物遗传育种以及临床治疗肌肉消耗和衰竭方面具有重要的潜在应用价值。根据猪肌生成抑制素基因全序列同源部分设计2条引物,PCR扩增出330bp的肌生成抑制素功能区基因片段,并将其克隆至pGEM-T载体,转化DH5 α受体菌, 获得重组质粒pGEM-T-MSTN 。将重组质粒pGEM-T-MSTN及载体pGEX-4T-1分别用BamHI、EcoRI酶解,回收目的片段并连接,构建表达载体MSTN-pGEX-4T-1,然后转化大肠杆菌BL21受体菌。经IPTG诱导,收集菌体,超声破碎离心,SDS-PAGE电泳,检测到38kDa蛋白目的蛋白带。优化目的蛋白的表达条件,可溶性融合蛋白诱导条件为27℃、5小时,终浓度为0.2mmol/L IPTG,表达量占裂解上清总蛋白含量的18%。细菌裂解后的上清经硫酸铵盐析,侧带法初步纯化后,GST-Sepharose4B亲和层析纯化并鉴定。获得猪肌生成抑制素功能区蛋白131ug/ml。为制备肌生成抑制素单克隆抗体和进一步研究肌生成抑制素的作用机制及寻找其受体奠定了基础。

论文目录

  • 前言
  • 第一篇 文献综述
  • 肌生成抑制素的研究进展
  • 第二篇 研究内容
  • 第一章 猪肌生成抑制素功能区编码基因克隆和重组表达质粒构建
  • 第一节 材料与方法
  • 第二节 结论
  • 第三节 讨论
  • 第四节 小结
  • 第二章 MSTN 功能区蛋白在大肠杆菌中的诱导表达
  • 第一节 材料与方法
  • 第二节 结论
  • 第三节 讨论
  • 第四节 小结
  • 第三章 MSTN 功能区蛋白纯化
  • 第一节 材料与方法
  • 第二节 结论
  • 第三节 讨论
  • 第四节 小结
  • 第三篇 结论
  • 参考文献
  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 致谢
  • 导师简介
  • 作者简介
  • 相关论文文献

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