论文题目: 同源盒基因的表达调控在结直肠癌细胞分化诱导过程中的作用机理研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 外科学
作者: 任辉
导师: 王巍
关键词: 同源盒基因,苯乙酸,结直肠癌
文献来源: 吉林大学
发表年度: 2005
论文摘要: 本项目针对转录过程的主控基因—同源盒基因家族(39 种基因)在苯乙酸对结直肠癌细胞的增殖抑制、诱导分化过程中的表达变化及苯乙酸的调控机理,进行了结直肠癌体外细胞培养的实验研究。在细胞水平、亚细胞水平、分子水平进行了流式细胞仪检测、透射电镜观察及半定量RT-PCR 检测。本研究通过流式细胞仪检测发现苯乙酸较为特殊的作用方式为:直接抑制结直肠癌细胞G1 期RNA 的合成。其作用机理为抑制肿瘤细胞的转录过程。本研究在电镜下观察了苯乙酸作用后结直肠癌细胞超微结构的变化。证实苯乙酸是作用极强的诱导分化剂,对结直肠癌细胞的增殖抑制存在时间和剂量依赖性。本实验在国内外首先探讨在正常结肠上皮细胞及应用苯乙酸诱导分化前后的结直肠癌细胞系,全部检测39种同源盒基因mRNA的表达水平,在分子水平上进一步证明苯乙酸对同源盒基因表达的调控作用,鉴定出了对苯乙酸应答的HOX 基因。这些结果证实了本实验的结论。
论文目录:
英文缩写词表
绪论
第一章 文献回顾
第一节 结直肠癌的诊断和治疗进展
一、分子病理学
二、影像学
三、手术治疗
四、结直肠癌肝转移
五、化疗和放疗
六、生物学治疗
(一) 免疫治疗
(二) 基因治疗
(三) 干细胞治疗
七、结直肠癌相关基因
第二节 同源盒基因与肿瘤
一、同源盒基因简介
二、同源盒基因在肿瘤中的表达及作用
三、分子生物学研究方法
四、结语
第三节 苯乙酸与肿瘤
一、苯乙酸简介
二、关于苯乙酸抗肿瘤的研究
三、国内关于苯乙酸抗肿瘤的报道
四、结语
第二章 材料与方法
第一节 材料
一、细胞株及诱导分化剂
(一) 细胞株
(二) 诱导分化剂
二、主要试剂与仪器
(一) 主要试剂
(二) 主要试剂配制及试剂盒
(三) 主要实验设备
三、PCR 引物序列
第二节 方法
一、细胞株的体外培养和传代
(一) 正常人结肠上皮细胞(IEC)的分离和体外培养
(二) 结直肠癌细胞系HCT-8 细胞的体外培养
二、细胞增殖检测
三、流式细胞术分析细胞周期
四、电子显微镜观察细胞超微结构
五、HOX 基因引物设计
六、逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测HOX 基因m RNA 表达
(一) RNA 提取
(二) RNA 纯度测定
(三) 逆转录第一链cDNA 合成
(四) PCR
七、PCR 产物电泳检测
八、统计学处理
第三章 结果
第一节 PA 对HCT-8 细胞增殖抑制和诱导分化作用
一、PA 对HCT-8 细胞增殖的影响
二、PA 对HCT-8 细胞周期的影响
三、PA 对HCT-8 细胞形态及超微结构的影响
第二节 PA 对HCT-8 细胞中HOX 基因组表达的影响
一、正常人结肠上皮细胞中HOX 基因组mRNA 的表达
二、结直肠癌HCT-8 细胞中HOX 基因组mRNA 的表达
三、PA 对结直肠癌HCT-8 细胞中HOX 基因组m RNA 表达的影响
第三节 PA 对HCT-8 细胞中HOX-I 基因家族表达的影响
一、正常人结肠上皮细胞中HOXA、B、C、D 族基因mRNA 的表达
二、HCT-8 中HOXA、B、C、D 族基因m RNA 的表达
三、PA 对HCT-8 中HOXA、B、C、D 族基因m RNA 表达的影响
四、定性分析小结
五、定量统计分析
第四节 PA 对HCT-8 细胞中HOX 靶基因表达的影响
结果部分附图
第四章 讨论
结论
参考文献
攻读博士其间发表的学术论文及其他成果
中文摘要
英文摘要
致谢
发布时间: 2005-08-26
参考文献
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