橡胶草胶乳蛋白双向电泳方法的建立及应用

论文摘要

橡胶草（Taraxacum Kok-saghyz Rodin）属菊科蒲公英属多年生草本,是世界主要产胶植物之一。橡胶草胶乳性质与巴西橡胶胶乳性质相似,都适用于橡胶工业。目前关于橡胶草胶乳蛋白相关的研究,国内外报道甚少。本试验利用蛋白质组学技术,建立橡胶草胶乳蛋白质双向电泳的方法；通过对橡胶草胶乳蛋白的初步分析,鉴定出一些橡胶草胶乳的不同丰度蛋白；另外,寻找与橡胶树胶乳合成相关的蛋白,对橡胶树胶乳的生物合成机制的研究提供新的研究角度和思路。通过实验初步得出如下结论：1.通过比较分析蛋白质的不同提取方法,发现Tris饱和酚法提取法适合橡胶草胶乳总蛋白质提取,所提取的蛋白质适用于后续的蛋白质双向电泳实验,为得到较好的2-DE图谱奠定了基础。2.通过优化双向电泳的条件（包括IPG胶条范围的选择、蛋白质上样量的确定以及凝胶染色方法比较等）,获得了质量较高的2-DE图谱。3.通过蛋白质质谱鉴定,首先质谱鉴定出11个阳性结果,经过数据库搜索得到一系列具有生物学功能的蛋白,其中包括与抗性、胁迫相关功能的蛋白：抗坏血酸过氧化物酶、叶绿体多酚氧化酶；参与细胞质骨架动态变化的肌动蛋白；参与糖酵解代谢的磷酸丙糖异构酶、烯醇酶等。4通过对比分析蛋白功能,发现烯醇酶和抗坏血酸过氧化物酶同时存在于橡胶草胶乳和橡胶树胶乳中。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 前言
• 1.1 橡胶草的研究进展
• 1.1.1 橡胶草的形态生理学
• 1.1.2 橡胶草的生长特性和栽培研究
• 1.1.3 橡胶草的乳管发育
• 1.1.4 橡胶草的橡胶合成研究
• 1.2 蛋白质组学的研究
• 1.2.1 蛋白质组学的概念及研究内容
• 1.2.2 蛋白质组学的研究进展和意义
• 1.2.3 蛋白质组学研究的相关技术及基本路线
• 1.2.4 植物蛋白质组学
• 1.3 本研究的意义和技术路线
• 2 试验材料与方法
• 2.1 材料
• 2.2 实验仪器
• 2.3 实验试剂
• 2.4 方法与步骤
• 2.4.1 橡胶草胶乳总蛋白的制备
• 2.4.2 橡胶树胶乳总蛋白的制备
• 2.4.3 样品蛋白的浓度测定
• 2.4.4 样品蛋白质的单向电泳
• 2.4.5 双向电泳
• 2.4.6 凝胶图像采集与胶图分析
• 2.4.7 蛋白质胶内酶解和MALDI-TOF-MS质谱分析
• 2.4.8 蛋白质数据库查询
• 3 结果与分析
• 3.1 蛋白质的定量检测
• 3.2 橡胶草胶乳蛋白两种提取方法的比较
• 3.2.1 橡胶草胶乳蛋白两种提取方法的SDS-PAGE图谱比较结果与分析
• 3.2.2 橡胶草胶乳蛋白两种提取方法的双向电泳图谱比较结果与分析
• 3.3 橡胶草胶乳蛋白电泳图谱的初步分析与应用
• 3.3.1 橡胶草胶乳蛋白双向图谱蛋白点的挖取
• 4 结论与讨论
• 4.1 结论
• 4.2 讨论
• 4.2.1 关于橡胶草胶乳样品采集
• 4.2.2 关于橡胶草胶乳蛋白的提取方法
• 4.2.3 关于蛋白质的上样量
• 4.2.4 关于第一向等电聚焦的条件
• 4.2.5 关于双向电泳图谱的蛋白质
• 4.2.6 关于鉴定的橡胶草胶乳蛋白
• 4.2.7 在橡胶树产胶机理上的应用
• 4.2.8 展望
• 参考文献
• 致谢
• 附录