论文摘要
背景:骨肉瘤是最常见原发于骨组织的恶性肿瘤,好发于青少年,其特点是侵袭力强、转移早,85%～90%的患者就诊时均存在不同程度的转移灶,肿瘤的转移是目前肿瘤治疗失败的最重要的原因,常导致患者死亡[1-3]。然而,对其确切的发病机制至今尚未明了。本实验室建立了两株来自同一母系但具有不同转移潜能的骨肉瘤细胞株:低增殖转移率细胞系F4和高增殖转移率细胞系F5M2,并利用全基因组芯片对其进行了表达谱的分析,发现了若干个差异表达的基因,其中FZD10就是基因芯片筛选出的差异基因中的一个,它在高转移潜能骨肉瘤细胞系F5M2中的表达明显高于低转移潜能骨肉瘤细胞系F4中的表达,提示其可能与骨肉瘤转移存在正相关的关系。Wnt途径是一条极为重要的细胞信号转导途径,其参与了从胚胎到成体的一系列控制胚胎早期发育、决定细胞的分化、增殖及其生长的调控,异常表达或激活该途径会导致各种疾病甚至肿瘤发生。FZD10基因是Frizzle基因家族的一员,其编码Wnt通路中的受体蛋白,在通路中发挥重要作用。目的:探讨骨肉瘤组织中FZD10的表达及其临床意义;初步研究FZD10在骨肉瘤SOSP-9607细胞中的生物学功能,为FZD10在骨肉瘤预后判断和治疗等方面的临床应用提供理论基础。方法:1.用SP免疫组化法对69例骨肉瘤及35例骨软骨瘤中FZD10蛋白的表达进行检测,并对其与骨肉瘤临床病理及预后的关系进行统计学分析。2.应用RNA干涉技术干扰FZD10基因表达并利用western-blot方法检验干涉后FZD10基因的表达水平。3. Transwell实验检测干涉FZD10基因后对SOSP-9607细胞侵袭的影响。4. MTT法检测干涉FZD10基因后对SOSP-9607细胞增殖的影响。5.流式细胞仪检测干涉FZD10基因后SOSP-9607细胞凋亡及周期的变化。结果:1. FZD10在骨肉瘤和骨软骨瘤组织中阳性表达率分别为89.9%和5.7%（P<0.01）。FZD10蛋白表达与Enneking分期和Price分级呈正相关,与WHO分型和预后相关。2.成功利用RNA干涉技术干扰FZD10基因表达。3. MTT结果显示,与阴性对照组相比实验组SOSP-9607细胞的增殖能力明显降低;Transwell实验结果显示,与阴性对照组相比实验组SOSP-9607细胞的侵袭和迁移能力明显降低。4.流式细胞仪检测凋亡显示,实验组凋亡率与阴性对照组凋亡率相比明显增高。实验组和对照组相比,处于G0/G1期细胞明显增多,处于G2/M期和S期细胞显著减少。结论:1.骨肉瘤FZD10基因的表达与肿瘤恶性程度密切相关,对骨肉瘤诊断和预后评估具有重要价值。2.抑制FZD10基因表达可显著抑制SOSP-9607细胞的增殖和侵袭,显著增加了SOSP-9607细胞的凋亡并且使其细胞周期发生停滞。