论文摘要
由大肠杆菌引起的疾病仍是一个没有完全解决的问题,给养猪业带来的损失不可低估；新近发现的各种毒力岛（PAI）使得大肠杆菌的致病力更具复杂性。ETT2（E. coli type three secretion system2）毒力岛全称为大肠杆菌Ⅲ型分泌系统2,约29.9kb。国外已有关于ETT2的报道。本研究选择江苏地区不同猪场的断奶仔猪水肿病和腹泻病料以及江苏5个奶牛场的奶牛乳腺炎病料进行细菌分离培养,根据对已所发表的ETT2毒力岛ECs3703和ECs3737基因序列的分析,设计2对特异性核苷酸引物并建立PCR检测方法。通过对临床病料的快速检测,表明32.50%的仔猪腹泻病例存在ETT2+大肠杆菌感染,而仔猪水肿病例和仔猪腹泻并发水肿病例的感染率分别为92.11%和91.67%；ETT2+大肠杆菌感染同样也见于奶牛乳腺炎病例,其感染率为38.98%。为了揭示ETT2毒力岛和大肠杆菌其他毒力因子的相关性,对22株ETEC.46株STEC.24株STEC/ETEC进行了ETT2毒力岛的PCR鉴定,结果显示ETT2毒力岛在ETEC和STEC中都被检测到。另外,数据还显示,在STEC和STEC/ETEC中ETT2的携带率要高于ETEC.其中ETT2阳性分离株占ETEC菌株的77.27%（17/22）,然而ETT2阳性分离株分别占STEC和STEC/ETEC菌株的86.96%（40/46）和83.33%（20/24）。通过对123株奶牛乳腺炎源大肠杆菌的分析,ETT2携带率为37.40%（46/123）；在这46株ETT2阳性分离株中,STb、LTa、HPI、CNF2、F17a、Tra和Hly的基因检出率分别为67.39%（31/46）、39.13%（18/46）、36.96%（17/46）、52.17%（24/46）、4.35%（2/46）、45.65%（21/46）、19.57%（9/46）。根据GenBank中所发表的ETT2毒力岛的35个基因序列,设计35对特异性核苷酸引物。通过对参考菌株的PCR扩增以及PCR产物的克隆与序列分析,证明了所设计的引物可用于ETT2毒力岛35段基因的特异性PCR检测。用建立的此PCR检测方法对123株ETT2+大肠杆菌（其中ETEC24株、STEC40株.STEC/ETEC22株,奶牛乳腺炎源46株）的ETT2毒力岛基因进行鉴定,结果共检测到11种ETT2毒力岛的类型,包括1个完整型（命名为A型）和10个不同程度的缺失型（分别命名为B、C、D、E、F、G、H、I、J和K型）。其中,猪源ETT2阳性分离株的ETT2类型有5种（A、B、E、F和G）,其中来自ETEC的17株ETT2阳性大肠杆菌中,3（17.65%）株属于ETT2完整型（A型）,1（5.88%）株属于B型,9（52.94%）株属于E型,2（11.76%）株属于F型和2（11.76%）株属于G型；来自STEC/ETEC的20株ETT2阳性大肠杆菌中,3（15.00%）属于A型,9（45.00%）属于B型和8（40.00%）属于E型；然而来自STEC的40株ETT2阳性大肠杆菌中,仅发现了两种类型,其中33（82.50%）株属于A型,7（17.50%）株属于E型。进一步分析显示,A型与Stx2e具有高度的相关性。然而,在奶牛乳腺炎病例中所获得的ETT2类型有8种（B、C、D、E、H、I、J和K型）,但是有6种（C、D、H、I、J和K型）是在猪源大肠杆菌中没有发现的。然而在奶牛乳腺炎病例的ETT2阳性分离株中没有检测到ETT2的A型、F型和G型。为确定ETT2毒力岛对大肠杆菌毒力的贡献,以评估其在动物中的致病危险,选择在本研究中分离鉴定的6株（B型、D型、H型、I型、J型和K型各一株）具有ETT2毒力岛不同程度缺失的分离株和1株（A型）具有完整的ETT2毒力岛的大肠杆菌为材料,以消化道为感染途径,测定其对4周龄的健康ICR小鼠的半数致死量（LD50）,以确定所分离的菌株致病力的大小。结果显示,B型菌株的LD50为5.335×105（0.2mL）,A型、H型、J型菌株的LD50均为9.486×107（0.2mL）,D型菌株的LD50为5.335×108（0.2mL）,I型菌株的LD50为9.486×108（0.2mL）,K型菌株的LD50为1.687×109（0.2mL）。
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相关论文文献
- [1].禽源大肠埃希菌ETT2毒力岛Duplex PCR检测[J]. 扬州大学学报(农业与生命科学版) 2017(04)
- [2].大肠埃希菌ETT2毒力岛ECs3703基因和HPI毒力岛irp2基因双重LAMP检测方法的建立[J]. 动物医学进展 2017(01)
- [3].禽致病性大肠杆菌ETT2转录因子eivF缺失株的生物学特性及转录组学分析[J]. 西北农林科技大学学报(自然科学版) 2020(08)