大连枣疯病病原鉴定

论文摘要

植原体是一类没有细胞壁、存在于植物韧皮部筛管细胞中的植物病原微生物。它可引起植物黄化、丛枝、花变叶、矮缩或花器退化等症状,导致粮食、果树、蔬菜、花卉等几百种植物致病。它所引起的病害已遍布世界各地,我国发生也很严重,其危害程度已上升为仅次于真菌、病毒病害的第三大类植物病害。本研究根据植原体病害的症状学特点,对我国部分省区果树植原体病害进行了病害调查并采样,以基于植原体,16S rRNA,基因设计的通用引物、运用巢式PCR,对其采集到的病样进行了分子生物学检测,以查明该类病害在果树上的发生现状。对采样中检测出来的大连市枣疯病植原体,进行了基因序列分析及计算机模拟的RFLP分析,填补了辽宁省大连地区枣疯病病原鉴定的空白。主要研究结果如下:1、以基于植原体,16S rRNA,基因设计的通用引物（R16mF2/R16mR1,及R16F2/R16R2）、运用直接及巢式,PCR,对从辽宁、河南、湖北等果树产区采集到的、100,多个疑似植原体病害的样本,进行了分子生物学检测,仅在辽宁省大连市的枣疯病样本中,出现了植原体特异的扩增条带。2、对大连市发病较严重的营城子区,进行了枣疯病发病率和病情指数的调查。该区枣疯病平均发病率为,22%、病情指数,8.67。电镜观察感病叶片的病组织超薄切片,在其韧皮部筛管细胞中发现了典型的植原体细胞。3、对大连枣疯株系（JWB-DL）的16S rDNA基因进行了序列测定,该序列（GenBank登录号为EF661582）为1851个核苷酸。将JWB-DL与NCBI中登录的序列进行Blast,序列比对,结果与属于16SrV,的榆树黄化植原体（GenBank登录号为AF189214）具有较高的同源性（98%）,推断JWB-DL应属于同一个组即榆树黄化组（16SrV）。计算机模拟RFLP分析也表明它属于榆树黄化组（16SrV）。将JWB-DL与所属植原体组中的各亚组代表株系进行16S rDNA序列比对,通过构建的系统发育树的聚类分析,表明JWB-DL,与CLY,,植原体同属于16SrV-B亚组。JWB-DL与其它种JWB相比,部分rRNA操纵子序列有所不同,表明JWB-DL是一个独特种。JWB-DL核糖体蛋白基因rplV-rpsC基因的核酸序列与麻纤维丛枝植原体（GenBank号:EF029093）一致,而不同于其它JWB植原体,它代表了一种新的、截然不同的Candidatus Phytoplasma ziziphi植原体。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 文献综述
• 1 植原体病害研究
• 1.1 植原体特性
• 1.2 植原体的发现及症状
• 1.3 植原体的分布
• 1.4 植原体的传播媒介与传毒特性
• 1.5 植原体的分类
• 1.6 植原体的检测
• 1.6.1 显微研究技术
• 1.6.2 血清学技术
• 1.6.3 核酸杂交技术
• 1.6.4 PCR 技术
• 2 枣疯病研究
• 2.1 枣疯病的危害及症状特点
• 2.2 枣疯病的诊断和病原鉴定
• 2.3 枣疯病传播途径与防治
• 3 本论文研究背景及主要研究内容
• 3.1 本论文研究背景
• 3.2 本论文主要研究内容
• 第2章 果树植原体病害普查及风险分析
• 1 调查及采样地点
• 2 植原体病害检测
• 2.1 实验材料与方法
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.2 实验方法
• 2.1.2.1 采样总DNA 的提取
• 2.1.2.2 引物合成
• 2.1.2.3 PCR 扩增
• 3 实验结果与分析
• 3.1 植原体症状特点与病害普查
• 3.2 PCR 检测
• 3.3 几种果树检疫性植原体病害风险分析
• 3.3.1 葡萄金黄化植原体
• 3.3.2 澳大利亚葡萄黄化植原体
• 3.3.3 苹果簇生植原体
• 3.3.4 梨衰退病植原体
• 3.3.5 桃X 植原体
• 3.3.6 杏褪绿卷叶植原体
• 3.3.7 蓝莓矮化植原体
• 3.3.8 草莓簇生病植原体
• 3.3.9 椰子致死黄化病植原体
• 3.3.10 来檬丛枝病植原体
• 4 结论与讨论
• 4.1 结论
• 4.2 讨论
• 第3章 大连地区枣疯病病害调查
• 1 实验材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 病害调查
• 1.2.2 感病叶片病组织超薄切片观察
• 2 实验结果与分析
• 2.1 枣疯病发生情况调查
• 2.2 受侵叶片病组织超微结构观察
• 3 结论
• 第4章 大连枣疯病病原鉴定
• 1 实验材料与方法
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验方法
• 1.2.1 感病植株总DNA 提取
• 1.2.2 PCR 扩增植原体 16S rRNA 基因片段
• 1.2.3 PCR 产物的序列测定及比较分析
• 1.2.4 计算机模拟的,RFLP 分析
• 2 实验结果与分析
• 2.1 序列分析
• 2.2 RFLP 电子酶切图谱
• 2.3 植原体株系系统进化树构建及分析
• 3 结论
• 结论
• 参考文献
• 在校期间发表的论文
• 致谢