无排卵型功能性子宫出血患者子宫内膜血管内皮生长因子及基质金属蛋白酶表达的分子研究

论文摘要

目的探讨雌激素、孕激素对去卵巢大鼠子宫内膜血管内皮生长因子（Vascularendothelial growth factor,VEGF）及基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMPs）表达的影响;无排卵型功能性子宫出血（dysfunctional uterine bleeding,DUB）患者子宫内膜雌、孕激素受体及血管内皮生长因子、基质金属蛋白酶表达变化的研究;孕激素及血管内皮生长因子抗体对功能性子宫出血患者子宫内膜间质细胞基质金属蛋白酶-9表达变化的影响。旨在探讨卵巢激素对子宫内膜微环境细胞因子表达的调控以及更年期无排卵型功能性子宫出血的子宫内膜局部微环境发病机制。方法1.建立卵巢去势大鼠模型（1）将卵巢去势大鼠分为5组,术后一个月开始分别给予雌激素（E）,孕激素（P）,雌激素（E）+孕激素（P）（即E作用14天后加用P14天）肌肉注射,每日一次;对照组（C）未注射任何药物,植物油组（O）注射助溶剂植物油,非手术组未用任何药物,28天后采用脱颈椎法处死各组动物,取得子宫内膜组织。（2）模拟人工周期:在雌激素（E）组分别于增生早、中、晚期即用药4天、8天、14天,雌激素（E）+孕激素（P）组分别于分泌早、中、晚期即加用黄体酮4天、8天、14天时各采用脱颈椎法处死动物,取得子宫内膜组织。通过免疫组化法检测各组大鼠子宫内膜雌、孕激素受体、微血管密度、血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及组织金属蛋白酶抑制物（TIMP-1）在子宫内膜的表达部位和表达水平。逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测各组大鼠子宫内膜血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及其抑制物（TIMP-1）表达并进行半定量分析。Westernblot法分析各组大鼠子宫内膜VEGF蛋白质表达并进行半定量分析。2.采用免疫组化法检测20例正常增殖期子宫内膜和66例无排卵型功能性子宫出血患者子宫内膜腺上皮和基质细胞ER,PR,Ⅳ型胶原,VEGF,MMP-9及TIMP-1分布和表达,RT-PCR法检测VEGFmRNA、MMP-9mRNA、TIMP-1mRNA的表达并进行半定量分析。Western blot法分析各组子宫内膜VEGF蛋白质表达并进行半定量分析。3.原代培养11例正常增殖期子宫内膜及16例更年期无排卵型功能性子宫出血患者子宫内膜间质细胞,采用ELISA法检测不同的VEGF抗体作用时间及不同的孕酮浓度对各组子宫内膜间质细胞MMP-9表达的影响。结果1.动物实验结果显示:与非去势组（N）相比,E组及E+P组子宫内膜微血管密度、VEGFmRNA及MMP-9mRNA水平均明显升高（P<0.05）,O组,C组及P组各指标明显下降（P<0.01）。卵巢去势后大鼠模拟人工周期激素替代治疗发现:子宫内膜ER、PR、VEGFmRNA及MMP-9mRNA表达呈雌激素依赖性,与用药时间成正相关,在雌激素作用基础上加用孕激素可抑制MMP-9表达水平。2.无排卵型功血患者子宫内膜腺上皮和基质细胞ER、PR表达高于对照组（P<0.05）,ER、PR表达与子宫内膜增生程度呈正相关。子宫内膜间质Ⅳ型胶原含量明显下降（P<0.01）,MMP-9活性明显增加（P<0.05）,MMP-9/TIMP-1比值升高（P<0.01）,VEGF蛋白表达高于对照组。相关分析显示:功血患者子宫内膜MMP-9水平与ER呈正相关（r=0.605,P<0.05）,与PR亦呈正相关（r=0.697,P<0.05）。3.功血组患者子宫内膜间质细胞MMP-9含量明显高于对照组,加入孕酮作用后,各组MMP-9含量均下降,功血组下降更明显,且高浓度孕酮有更强的抑制作用（P<0.05）。VEGF抗体作用后各组MMP-9含量均下降,以功血组明显（P<0.05）,但不同作用时间对MMP-9含量无显著影响（P>0.05）。结论1.子宫内膜周期性变化主要受卵巢雌、孕激素的影响,同时子宫内膜微环境中的细胞因子和酶等通过自分泌和旁分泌方式参与调节子宫内膜复杂的生理和病理过程。2.无排卵型功能性子宫出血患者子宫内膜出血原因可能与激素水平作用下ER、PR表达失调有关,VEGF水平升高,子宫内膜血管通透性增加,且MMP-9水平异常升高,导致细胞外基质过度降解,临床表现为子宫不规则出血。3.更年期无排卵型子宫出血患者子宫内膜间质细胞分泌MMP-9水平较对照组高,VEGF抗体及孕酮对间质细胞MMP-9的分泌有降调作用。功血患者子宫内膜间质细胞分泌较高水平MMP-9, VEGF抗体和孕酮均能下调MMP-9水平,提示VEGF和MMPs均参与了功能性子宫出血的病理过程。以上结论提示子宫内膜局部微环境中细胞因子的改变在子宫内膜生理和病理过程的作用,对更年期无排卵型功能性子宫出血患者子宫内膜局部微环境细胞因子变化的分子机制的研究,有助于设计和寻找治疗功血的新思路和措施,如使用激素受体抑制剂,人工合成或提取天然的金属蛋白酶抑制剂等用于功血的治疗。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 正文
• 第一部分 雌、孕激素对去卵巢大鼠子宫内膜血管内皮生长因子表达及基质金属蛋白酶活性的影响
• 材料
• 方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第二部分 无排卵型功能性子宫出血患者子宫内膜雌、孕激素受体和血管内皮生长因子及基质金属蛋白酶表达变化的研究
• 材料与方法
• 方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第三部分 VEGF抗体及孕酮对无排卵型功能性子宫出血患者子宫内膜间质细胞MMP-9表达的影响
• 方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 综述 子宫内膜血管和基质调控因子在月经周期及无排卵型功能性子宫出血中的作用
• 附录
• 致谢