论文题目: 三种重要海水养殖鱼类的分子遗传学研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 水产品加工与贮藏工程
作者: 刘云国
导师: 李八方,陈松林,汪东风
关键词: 牙鲆,大菱鲆,真鲷,分子标记,遗传变异
文献来源: 中国海洋大学
发表年度: 2005
论文摘要: 近年来,虽然海水鱼类养殖业发展迅速,但育种工作的滞后却成为制约养殖业进一步发展的瓶颈。牙鲆、大菱鲆、真鲷是当前我国重要的海水养殖鱼类。然而,对这些鱼类育种工作中遇到的一些基础问题如群体遗传结构分析、选择性养殖群体同普通群体的遗传差异比较、超低温保存后鱼苗的遗传多样性评估、微卫星标记筛选等研究较少,本文针对这些重要海水养殖鱼类在育种工作中遇到的上述问题利用AFLP、SSR、ISSR、RAPD分子标记技术进行了探讨。利用AFLP、SSR、ISSR、RAPD标记比较了牙鲆普通群体和选择性养殖群体的遗传结构差异;利用AFLP标记筛选到了部分牙鲆抗病候选标记;利用SSR标记分析了超低温保存精子孵化的大菱鲆的遗传多样性;从真鲷cDNA文库中开发了一批微卫星标记;以期加快这些重要海水养殖鱼类在遗传变异分析、分子标记辅助育种、重要经济价值基因定位及遗传图谱构建等方面的研究工作。本文的主要工作及结论如下: 1.利用10对AFLP引物组合对三个牙鲆群体60个个体进行了遗传结构分析。 普通群体、感病群体和抗病群体扩增的条带总数分别为491、462、485,两个选择性养殖群体的总带数都低于普通群体。普通群体的多态性位点总数为323,而感病群体和抗病群体分别为284和279,普通群体的多态性位点总数显著(P<0.05)高于选择性养殖群体。三个群体的多态位点百分比(PPB)分别为65.78%(普通群体),61.47%(感病群体),60.927%(抗病群体)。另外,发现三个群体的一些AFLP位点存在频率差异。在低频区间(0～0.2),普通群体的位点数显著(P<0.05)多于两个选择性养殖群体;而在高频区间(0.6～1.0),选择性养殖群体的位点数又多于普通群体。这说明选择性养殖群体同普通群体之间已经产生了一定的遗传距离。 2.利用61对AFLP引物组合扫描了牙鲆感病群体和抗病群体各20个个体,虽然没有发现在一个群体中全显性而在另一个群体中全隐性的标记。但有一些
论文目录:
摘要
Abstract
第一章 前言
第一节 水生动物育种技术
第二节 遗传标记技术
第三节 分子标记技术在水生动物遗传学研究中的应用
第四节 本论文的研究目的及意义
第二章 牙鲆选择性养殖群体遗传结构分析及抗病分子标记筛选
第一节 牙鲆AFLP反应条件的优化
0 引言
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.2 牙鲆基因组DNA的提取
1.3 AFLP反应流程
1.4 AFLP重复性试验
2 结果与分析
2.1 DNA酶切检测
2.2 酶切产物浓度试验
2.3 预扩增浓度试验
2.4 引物组合筛选试验
2.5 AFLP重复性试验
3 讨论
3.1 DNA模板质量和浓度
3.2 限制性内切酶组合
3.3 引物设计
3.4 引物筛选和PCR反应程序
第二节 牙鲆选择性养殖群体遗传结构的AFLP标记分析
0 引言
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.2 牙鲆基因组DNA的提取
1.3 AFLP反应
1.4 数据分析
2 结果与分析
2.1 三个牙鲆群体的AFLP多态性
2.2 普通群体同选择性养殖群体的遗传结构差异
3 讨论
3.1 AFLP多态性
3.2 选择性养殖群体的遗传变异
第三节 牙鲆抗病分子标记筛选与克隆
0 引言
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.2 牙鲆基因组DNA的提取
1.3 AFLP反应流程
1.4 PAGE胶AFLP目的带的回收
1.5 PAGE胶回收产物的再扩增
1.6 AFLP目的带的克隆
2 结果与分析
2.1 抗病候选标记的筛选
2.2 目的AFLP产物的回收及重新扩增结果
2.3 目的AFLP片段的克隆
3 讨论
第四节 牙鲆选择性养殖群体遗传结构的微卫星标记分析
0 引言
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.2 牙鲆基因组DNA的提取
1.3 牙鲆基因组DNA的微卫星分析
1.4 数据分析
2 结果与分析
2.1 微卫星位点的多态性
2.2 普通群体和选择性养殖群体的遗传多样性
3 讨论
第五节 牙鲆选择性养殖群体遗传结构的ISSR标记分析
0 引言
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.2 牙鲆基因组DNA的提取
1.3 牙鲆基因组DNA的ISSR分析
1.4 数据分析
2 结果与分析
2.1 ISSR位点的多态性
2.2 普通群体同选择性养殖群体的遗传多样性比较
3 讨论
3.1 ISSR反应条件优化
3.2 ISSR多态性
3.3 选择性养殖群体的遗传变异
第六节 牙鲆选择性养殖群体遗传结构的RAPD标记分析
0 引言
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.2 牙鲆基因组DNA的提取
1.3 牙鲆基因组DNA的RAPD分析
1.4 数据分析
2 结果与分析
2.1 RAPD位点的多态性
2.2 普通群体同选择性养殖群体的遗传多样性比较
3 讨论
3.1 RAPD多态性
3.2 选择性养殖群体的遗传变异
第七节 四种分子标记方法遗传结构分析的比较研究
0 引言
1 四种分子标记间的多态性差异
2 四种分子标记分析选择性养殖群体遗传变异的差异
3 四种分子标记分析选择性养殖群体遗传变异总结
第三章 精子冷冻保存对大菱鲆后代遗传结构影响的微卫星分析
0 引言
1 材料与方法
1.1 配子收集及精子冷冻
1.2 两种大菱鲆鱼苗的获得
1.3 大菱鲆基因组DNA的提取
1.4 基因组DNA的微卫星分析
1.5 数据分析
2 结果与分析
2.1 精子冷冻保存及授精结果
2.2 冻精和鲜精受精大菱鲆鱼苗的遗传多样性比较
3 讨论
第四章 真鲷微卫星标记的开发
第一节 真鲷ESTs文库中微卫星序列的筛选及特征分析
0 引言
1 材料与方法
1.1 cDNA文库的构建
1.2 文库的序列测定
1.3 微卫星序列的查找
2 结果与分析
3 讨论
第二节 真鲷微卫星引物筛选和微卫星标记开发
0 引言
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.2 真鲷基因组DNA的提取
1.3 微卫星引物的设计
1.4 真鲷微卫星扩增
1.5 数据分析
2 结果与分析
2.1 引物设计和初步筛选
2.2 多态性微卫星序列的筛选
2.3 真鲷微卫星标记在其它一些鱼类上的扩增结果
3 讨论
3.1 ESTs微卫星标记的特点
3.2 微卫星引物设计
3.3 微卫星标记的多态性
3.4 微卫星标记的通用性
参考文献
致谢
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发布时间: 2005-10-26
参考文献
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