电针促进脑缺血再灌注损伤大鼠肢体功能改善和脑损伤区PCNA、VEGF表达的实验研究

论文摘要

缺血性脑卒中作为临床危、急、重病之一,发病既有复杂的病理基础,又有其凶险多变的演变过程,不但给患者的生命造成严重威胁,而且肢体运动障碍、语言障碍、认知能力下降等后遗症状,也给患者本人、家庭和社会带来了沉重的负担。在我国,随着社会经济的发展,人民生活水平不断提高和老龄化社会的到来,本病的发病率逐年升高,因此深入研究脑卒中的发病机制,积极探索有效的治疗方法是临床工作者和科研工作者的共同目标。针刺治疗脑卒中在我国已经有数千年的历史,早在《内经》、《针灸甲乙经》等经典著作中就有过相关记载,尤其在恢复期针刺能够促进机体功能的恢复,如肢体功能、吞咽功能等,目前仍然被临床广泛应用。实验研究证实,针刺能改善实验性脑缺血损伤动物神经症状的缺损、降低缺血缺氧对组织的损伤程度、促进损伤区的修复和功能重建等。尽早恢复缺血半暗区的血液循环,改善局部缺氧状态,防止损伤的进一步加重是脑卒中治疗过程中的重点,本实验从缺血损伤区血管再生为切入点,观察局部PCNA、VEGF表达的变化,结合肢体功能恢复情况,验证针刺的治疗作用,并探讨可能的作用机制。研究目的:通过观察局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠不同时间点肢体运动功能的变化及损伤脑组织核心增长蛋白(PCNA)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达情况,电针“曲池”、“后三里”穴对以上各指标的影响、电针“曲池”、“后三里”对给予eNOS抑制剂对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠的影响,研究针刺对大鼠脑缺血再灌注损伤区血管再生的作用,探讨针刺促进脑功能恢复的血管生成可能机制,为进一步深化针灸治疗缺血性中风的认识提供新的思路和实验依据。实验方法:(1)栓线法闭塞大鼠大脑中动脉造成局灶性脑缺血再灌注模型(MCAO模型);(2)电针“曲池”、“后三里”穴作为治疗手段;(3)肢体运动功能的实验方法观察脑功能的恢复状况;(4)免疫组化的方法观察大鼠脑组织缺血损伤区PCNA、VEGF表达的变化;(5)选择性抑制与VEGF有相互促进作用的eNOS,观察大鼠肢体运动功能变化和脑内PCNA、VEGF表达的变化。实验结果:(1)局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠肢体运动功能发生改变,表现为其他实验组大鼠肌力测试和网格实验结果与正常组相比有明显差异;针刺可以改善肢体运动功能评分,针刺组大鼠评分优于模型组;注射eNOS抑制剂后,针刺的作用减弱。(2)脑缺血再灌注后脑内可见PCNA阳性细胞,针刺组大鼠脑损伤区PCNA阳性细胞多于模型组。(3)脑缺血再灌注脑损伤区可见VEGF阳性细胞,针刺组大鼠脑损伤区VEGF阳性细胞多于模型组。(4)给予eNOS抑制剂后,VEGF阳性细胞数量有所减少。(5)模型组和针刺组脑缺血再灌注损伤14d时,PCNA和VEGF的表达都较7d组有所降低。实验结论:(1)脑缺血再灌注损伤后大鼠的肢体运动功能发生改变,针刺可以促进肢体功能恢复;(2)脑缺损伤区可见PCNA阳性细胞,存在细胞再生现象,针刺可以增强损伤区PCNA的表达,有利于损伤的修复和功能重建;(3)针刺组和模型组14d时缺血损伤区PCNA阳性细胞百分比低于7d组,随着损伤逐渐得到修复,细胞增殖现象减弱;(4)脑缺血损伤区可见VEGF阳性细胞,存在内皮型细胞再生现象,针刺可以增强损伤区VEGF的表达,有利于脑损伤后保护和缺血区血管再生;(5)针刺组和模型组14d时缺血损伤区VEGF阳性细胞百分比低于7d组,随着缺血损伤的修复,缺血缺氧状态得到改善,产生的VEGF减少;(6)由于脑损伤区同时出现PCNA阳性细胞和VEGF阳性细胞,前者是增殖细胞的标志,后者是促进血管再生的重要因子,可以推断,脑缺血再灌注损伤后脑内存在血管再生现象,针刺可以促进损伤区的血管再生,更迅速而充分的恢复损伤区的血供,促进脑损伤区的修复;(7)抑制剂针刺组脑损伤区VEGF阳性细胞百分比与针刺组相比有不同程度的降低,说明针刺促进缺血损伤区VEGF表达部分依赖eNOS的存在。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 缩略词表
• 第一部分 文献综述
• 1 脑缺血再灌注血管损伤与修复再生相关研究
• 1.1 血管内皮细胞功能
• 1.2 脑缺血再灌注血管损伤的机制
• 1.3 血管生成机制研究
• 1.4 参考文献
• 2 脑卒中实验动物的行为学检测方法
• 2.1 神经功能评分
• 2.2 平衡和协调能力
• 2.3 肌力检测
• 2.4 感觉和运动功能评测
• 2.5 新异环境的适应情况
• 2.6 认知和记忆功能评测（cognitive function evaluation）
• 2.7 参考文献
• 3 针灸治疗实验性脑缺血再灌注损伤
• 3.1 针灸介入时间
• 3.2 穴位组合
• 3.3 取穴部位
• 3.4 针灸方法
• 3.5 参考文献
• 第二部分 动物实验研究
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 实验方法
• 2.3 指标检测
• 2.4 数据处理分析
• 2.5 技术路线图
• 3 实验结果
• 3.1 大鼠肌力测定
• 3.2 大鼠网格实验
• 3.3 脑PCNA表达的检测
• 3.4 脑VEGF表达的检测
• 4 讨论
• 4.1 历代医家对中风病认识
• 4.2 选穴依据和针刺效应
• 4.3 缺血半暗区PCNA表达的意义及针刺的作用
• 4.4 缺血半暗区VEGF表达的意义及针刺的作用
• 4.5 eNOS的作用及其对与VEGF表达的影响
• 5 小结
• 6 参考文献
• 致谢
• 个人简历
• 附图