东亚飞蝗Toll-9受体基因及组织定位

论文摘要

昆虫没有获得性免疫系统,其免疫防御体系主要依赖其高效的先天性免疫,包括细胞免疫和体液免疫。其中由昆虫脂肪体合成、分泌抗菌肽而形成的体液免疫比细胞免疫更快更早地产生防御应答。抗菌肽的合成由两条不同的信号通道调节:Toll信号途径和Imd信号途径,它们介导合成不同的抗菌肽。其中Toll信号途径能够介导机体对入侵的病原真菌和革兰氏阳性细菌的感染快速地产生相应的抗菌肽。Toll受体是昆虫Toll信号转导途径的一个重要组成成员,主要功能是将胞外识别蛋白探测到的危险信号传递到胞内,激活昆虫机体对入侵病原微生物的先天性免疫应答,在昆虫的先天性免疫系统中起着十分重要的作用。本研究采用RT-PCR和RACE方法从东亚飞蝗（Locusta migratoria manilensi）中克隆了Toll-9受体基因（缩写名为LmToll-9）的部分cDNA序列（GeneBank登录号:EU573213）,分析了该基因在不同组织的表达特征。获得的cDNA包括3’端,长1231 bp,含一个长918 bp的开放阅读框,编码305个氨基酸,推测的氨基酸序列与其他昆虫的Toll-9受体基因有较高的相似性。已经获得的东亚飞蝗Toll-9受体部分氨基酸序列具有昆虫Toll受体家族的部分典型结构,包括胞内的TIR结构域和跨膜区域。半定量RT-PCR研究表明,LmToll-9基因只在东亚飞蝗的中肠组织中表达,而在东亚飞蝗的头部、脂肪体、后腿和血细胞中均未发现该基因的转录。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 绪论
• 1.1 引言
• 1.2 研究背景及进展
• 1.2.1 Toll 样受体研究进展
• 1.2.2 Toll 样受体信号传导途径的研究进展
• 1.2.3 昆虫Toll 受体研究进展
• 1.3 研究目的
• 1.4 研究内容及技术路线
• 1.4.1 研究内容
• 1.4.2 技术路线
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 供试昆虫
• 2.1.2 菌株
• 2.1.3 主要仪器设备
• 2.1.4 主要试剂
• 2.1.5 主要溶液配制
• 2.2 东亚飞蝗Toll-9 （LmToll-9） 基因的克隆及序列分析
• 2.2.1 3'RACE 克隆LmToll-9 基因
• 2.2.2 5′RACE 克隆 LmToll-9 基因
• 2.2.3 LmToll-9 基因的序列解析及系统发育树的建立
• 2.2.4 半定量RT-PCR 检测LmToll-9 基因的表达
• 3 结果与分析
• 3.1 东亚飞蝗Toll （LmToll-9） 基因的克隆与分析
• 3.1.1 RT-PCR 克隆LmToll-9 基因片段
• 3.1.2 3'RACE 克隆LmToll-9 基因的3'端序列
• 3.1.3 5'RACE 克隆LmToll-9 基因的5'端序列
• 3.1.4 LmToll-9 基因的序列解析及进化树的建立
• 3.1.5 东亚飞蝗LmToll-9 基因的组织定位
• 4 讨论
• 4.1 东亚飞蝗 Toll-9 基因及组织定位
• 4.2 小结
• 5 结论及后续工作建议
• 致谢
• 参考文献
• 附录