乳腺癌患者血液中线粒体DNA拷贝量与抗氧化体系的研究

论文摘要

背景:线粒体DNA（mitochodrial,mtDNA）存在于线粒体,是核外的唯一的遗传物质,因缺乏组蛋白保护,且损伤修复系统不完善,容易成为致癌物质和ROS攻击的靶子,现已研究发现其与多种疾病及肿瘤的发生、发展有关。而抗氧化体系作为清除ROS的主要系统,与线粒体也是密切相关。那么mtDNA与抗氧化体系是否存在相关性,具体的信号传导途径是什么,还有待进一步研究。目的:1)检测mtDNA拷贝量在乳腺癌患者血液中的变化;2)检测乳腺癌患者血液抗氧化体系GSH-Px、SOD和MDA含量的变化;3)探讨乳腺癌患者血液mtDNA拷贝量变化与GSH-Px、SOD和MDA关系。方法:1)采用聚合酶链反应（PCR）,分别扩增乳腺癌组25例,健康对照组18例的线粒体D-loop区的HV1和HV2区,并以核基因组的β-actin作为定量标准物,聚丙烯酰胺凝胶电泳银染法比较血液中mtDNA拷贝量的差异。2)生化检测法检测乳腺癌组25例,健康对照组18例,血液中GSH-Px、SOD和MDA的变化。结果:1)mtDNA拷贝量变化,以HV1为参考（β-actin作内参）乳腺癌组低于健康对照组,两者比较有统计学意义（p＜0.05）;以HV2为参考（β-actin作内参）乳腺癌组也低于健康对照组,两者比较有统计学意义（p＜0.05）;并且HV1与HV2的变化呈正相关（p＜0.01）,TNM分期Ⅰ期高于Ⅱ期,Ⅱ期高于Ⅲ期,且Ⅰ期与Ⅲ期比较有统计学意义（p＜0.05）;2)检测血清中GSH-Px、SOD、MDA变化,乳腺癌组GSH-Px和SOD活性明显低于对照组（p＜0.01）;而乳腺癌组MDA含量明显高于对照组（p＜0.01）;且MDA在淋巴结转移组高于无淋巴结转移组（p＜0.05）,TNM分期Ⅰ期低于Ⅱ期,Ⅱ期低于Ⅲ期,且Ⅰ期与Ⅲ期比较有统计学意义（p＜0.05）;而GSH-Px、SOD在淋巴结转移组与无淋巴结转移组的比较中无统计学意义（p＞0.05）,TNM分期Ⅰ期高于Ⅱ期,Ⅱ期高于Ⅲ期,且Ⅰ期与Ⅲ期比较有统计学意义（p＜0.05）。结论:1)乳腺癌中线粒体DNA拷贝量与抗氧化体系变化呈正相关。2)线粒体DNA拷贝数的检测以及抗氧化体系的破坏可以对乳腺癌的诊断起辅助作用,并提示与临床分期相关。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一章 实验材料
• 1.1 材料来源
• 1.2 实验仪器
• 1.3 实验试剂
• 1.4 试剂配制
• 第二章 实验方法
• 2.1 PCR结合银染法检测血液mtDNA拷贝量
• 2.1.1 全血DNA的提取
• 2.1.2 常规聚合酶链反应
• 2.1.3 PCR产物的检测
• 2.1.4 PAGE银染
• 2.1.5 型成像系统成相保存,并用GelDoc XR图像分析系统分析图像,保存数据。
• 2.2 生化检测法测定GSH-Px、SOD、MDA
• 2.2.1 血清谷胱甘肽过氧化物酶GSH-PX酶活力的测定
• 2.2.2 血清超氧化物歧化酶（SOD）活力测定
• 2.2.3 血清丙二醛（MDA）含量的测定
• 第三章 实验结果
• 3.1 乳腺癌患者血液mtDNA拷贝量变化
• 3.1.1 血液全DNA提取结果
• 3.1.2 PCR扩增结果
• 3.1.3 聚丙烯酰胺-银染分析结果
• 3.2 生化检测法测定血清GSH-Px、SOD、MDA
• 3.3 相关性分析
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 综述
• 参考文献