凝结芽孢杆菌分离筛选及复合益生菌剂的应用研究

论文摘要

采用改良MRS培养基,从土壤中分离一株能抑制常见病原菌的产酸芽孢杆菌。该菌株对大肠杆菌（Escherichia coli O139,E.coli K88,E.coli K99）,伤寒沙门氏菌（Salmonella typhimurium O4Hi,ST O4Hi）,金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）等均有较强的抑制作用,经生理生化实验和16S rDNA序列分析鉴定为凝结芽孢杆菌（Bacillus coagulans）。该菌株经模拟胃液处理30 min后存活率为91%,耐胆盐浓度达3.0%,小鼠急性毒性实验结论为无毒无害物质,此菌株安全可靠。研究结果表明该菌株可以顺利通过胃酸进入小肠后开始作用,改善肠道微生态环境,具有作为微生态制剂菌株的应用潜力。对此株凝结芽孢杆菌培养条件进行优化,以摇瓶发酵的方法,采用Plcakett-Burman设计法从9种原料中筛选出2种对凝结芽孢杆菌菌数有显著影响的因素,即葡萄糖和碳酸钙。然后针对葡萄糖、碳酸钙、胰蛋白胨这三个因素进行最陡爬坡试验及中心组合设计优化最佳培养基。优化后培养基为葡萄糖16 g/L、氯化钠4 g/L、酵母粉6 g/L、胰蛋白胨20 g/L、牛肉膏6 g/L、磷酸二氢钾2 g/L、硫酸镁1 g/L、硫酸锰0.25 g/L、碳酸钙3 g/L,菌数可达2.1×109cfu/mL。将实验室两种益生菌剂A、益生菌剂B替代抗生素复合使用于仔猪饲料中,菌剂A、菌剂B按2:3的比例添加于配合饲料中。选取二元杂（长×大）及三元杂（杜×长×大）仔猪,进行了两轮饲养实验。通过平均增重、料肉比、腹泻率等指标探讨混合菌剂的作用效果。结果表明:断奶后21-35日龄,配合饲料中益生菌剂添加量0.02%,35-50日龄配合饲料中益生菌剂添加量0.1%,效果最好,与抗生素组相比,小猪增重没有显著差异,但显著提高饲料转化率,腹泻率降低51.7%。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略词（Abbreviation）
• 1 前言
• 1.1 益生菌
• 1.1.1 益生菌的定义
• 1.1.2 益生菌筛选
• 1.2 凝结芽孢杆菌的研究意义
• 1.3 芽孢形成和特性
• 1.3.1 芽孢结构
• 1.3.2 芽孢形成过程
• 1.4 饲用抗生素的淡出和微生态制剂的发展
• 1.4.1 乳酸菌的功能及作用机理
• 1.4.2 芽孢杆菌的作用及研究意义
• 1.5 微生态制剂对动物养殖的好处及应用
• 1.5.1 促进动物生长发育
• 1.5.2 增强动物免疫能力
• 1.5.3 防止动物幼仔腹泻
• 1.5.4 益生菌在猪饲养中的应用
• 1.5.5 益生菌在鸡饲养中的应用
• 1.6 实验设计中一些常用的统计分析方法
• 1.6.1 试验设计原则
• 1.6.2 试验设计常用软件
• 1.7 课题的立题依据、目的及意义
• 2 材料和方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 指示菌株
• 2.1.2 药品
• 2.1.3 主要培养基
• 2.1.4 试剂与缓冲溶液
• 2.1.5 主要仪器和设备
• 2.2 凝结芽孢杆菌分离筛选及特性研究
• 2.2.1 凝结芽孢杆菌的分离筛选
• 2.2.2 凝结芽孢杆菌的鉴定
• 2.2.3 凝结芽孢杆菌的特性分析
• 2.3 凝结芽孢杆菌高密度发酵培养基优化
• 2.3.1 Plcakett-Burman设计
• 2.3.2 中心组合设计
• 2.4 凝结芽孢杆菌产芽孢培养基初步研究
• 2.4.1 不同初始糖浓度对芽孢形成的影响
• 2.4.2 不同温度对芽孢形成的影响
• 2.4.3 不同转速对芽孢形成的影响
• 2.4.4 酒精干酵母对糖的发酵作用
• 2.4.5 在对数生长期末期添加酒精酵母降低糖浓度
• 2.5 微生态制剂对仔猪饲养的应用研究
• 2.5.1 复合菌剂的应用试验（第一次）
• 2.5.2 复合菌剂应用试验（第二次）
• 2.5.3 统计、分析方法
• 3 结果与分析
• 3.1 凝结芽孢杆菌的分离筛选
• 3.1.1 凝结芽孢杆菌的分离
• 3.1.2 凝结芽孢杆菌的鉴定
• 3.2 凝结芽孢杆菌的特性分析
• 3.2.1 凝结芽孢杆菌基本性质
• 3.2.2 耐模拟胃液能力
• 3.2.3 耐胆盐能力
• 3.2.4 耐抗生素能力
• 3.2.5 急性毒性实验
• 3.3 凝结芽孢杆菌高密度发酵初步研究
• 3.3.1 影响凝结芽孢杆菌增值的重要因素
• 3.3.2 最陡爬坡试验
• 3.4 凝结芽孢杆菌产芽孢培养基初步研究
• 3.4.1 不同因素对凝结芽孢杆菌芽孢生成的影响
• 3.4.2 酒精酵母对培养基中糖发酵作用
• 3.4.3 添加酒精干酵母对凝结芽孢杆菌芽孢形成的作用
• 3.5 微生态制剂对仔猪饲养的应用研究
• 3.5.1 桑梓湖种猪场试验结果及分析
• 3.5.2 海南保亭猪场试验结果及分析
• 4 结论
• 5 讨论
• 5.1 凝结芽孢杆菌筛选及鉴定
• 5.2 体外益生特性分析
• 5.3 凝结芽孢杆菌芽孢形成
• 5.4 复合菌剂的应用试验
• 5.5 微生态制剂的发展方向
• 参考文献
• 致谢
• 附录