论文摘要
目的SARI基因是近年来发现的一种新型抑癌基因,它在多种正常组织细胞中均有表达,而在许多实体肿瘤中表达水平明显下降。然而其表达异常机制尚不清楚。本课题通过检测慢性髓细胞白血病患者与正常人中SARI基因中的表达水平,以慢性髓细胞白血病细胞系K562为模型,探讨SARI基因在慢性髓细胞白血病中的作用及其表达调节可能的分子机制,为慢性髓细胞白血病基因治疗的研究提供新线索。方法（1）初发慢性髓细胞白血病患者中SARI表达水平的研究：46名初发慢性髓细胞白血病患者作为实验组,40名健康受试者作为正常对照组。采集每位患者和健康受试者的外周血,分离单个核细胞,使用实时定量PCR技术检测两组人群中SARI基因的相对表达水平。（2） SARI基因在慢性髓细胞白血病中表达异常分子机制的研究：以慢性髓细胞白血病细胞系K562为研究模型,使用Bcr-Abl抑制剂STI571处理K562细胞,做时间梯度实验和浓度梯度实验。设置浓度梯度：0,0.5,1.5,2.5μM及时间梯度：6,12,24小时。收集各组细胞,用实时定量PCR技术检测各组SARI基因表达情况。使用P13K抑制剂LY294002 （20μM）, MEK抑制剂PD98059 （50μM）, JAK抑制剂Ag490（501μM）处理K562细胞24小时后收集各组细胞,以未处理K562细胞作为对照组,用实时定量PCR技术检测各组SARI基因表达情况。（3）SARI基因在慢性髓细胞白血病中作用的研究：使用SARI特异性siRNA转染K562细胞：siRNA+转染液+K562细胞为实验组,转染液+K562细胞为Mock对照组,未转染K562细胞为空白对照组。使用750ng SARI特异性siRNA转染K562细胞72小时,用实时定量PCR技术检测K562细胞中SARI基因表达水平,确定其干扰效率。用STI571（2.5μM）分别处理实验组和Mock对照组K562细胞24小时,用流式细胞术检测两组K562细胞凋亡率及STI571处理后两组K562细胞的凋亡率。结果1.初发慢性髓细胞白血病患者中SARI表达水平的研究与正常对照组（n=40）相比,实验组（n=46） SARI基因表达在mRNA水平明显降低,三次实验结果所得数据经过Student’s unpaired t-test分析,p<0.001,两组间具有明显的统计学差异。2. SARI基因在慢性髓细胞白血病中表达异常分子机制的研究2.1 STI571对SARI基因表达的影响使用STI571（1.5μM）处理K562细胞12小时后SARI基因mRNA表达水平开始增高。在浓度梯度实验中,各组SARI基因表达未显示明显的浓度依赖关系；在时间梯度实验中,各组SARI基因表达显示较明显的时间依赖性,随着处理时间的延长,SARI基因表达逐渐升高。2.2信号通路抑制剂对SARI基因表达的影响用MEK抑制剂PD98059处理24小时后,K562细胞中SARI基因1mRNA表达水平高于对照组（p<0.05）；与之相似,用JAK抑制剂Ag490处理24小时后,K562细胞中SARI基因mRNA表达水平高于对照组（p<0.05）；而PI3K抑制剂处理24小时后,K562细胞中SARI基因mRNA表达水平下降。3. SARI基因在慢性髓细胞白血病中作用的研究3.1 SARI特异性siRNA干扰效应与Mock对照组相比,使用SARI特异性siRNA（750ng）转染K562细胞72小时后,SARI基因mRNA表达水平降低了72%（p<0.001）；而空白对照组和Mock对照组SARI基因mRNA表达水平无明显差异（p>0.05）。3.2 SARI干扰对K562细胞凋亡的影响使用流式细胞术检测各组凋亡率,与Mock对照组相比,实验组K562细胞凋亡率增加了（1.74±0.30）%,p=0.05)。3.3 SARI干扰对STI571诱导细胞凋亡的影响实验组与Mock对照组经过STI571（2.5μM）处理24小时后,使用流式细胞术检测两组凋亡率,与Mock对照组相比,实验组K562细胞凋亡率减少了（（7.61±0.16）%,p<0.001）。结论慢性髓细胞白血病患者外周血SARI mRNA表达水平降低可能与该疾病的发生发展过程相关联。在慢性髓细胞白血病细胞系K562中,SARI基因表达下调与Bcr-Abl抑制作用有关,而Bcr-Abl下调SARI基因表达可能是通过其下游MEK和JAK信号通路实现的。干扰SARI基因在K562细胞中表达部分降低了STI571诱导的凋亡作用,SARI基因可能参与了STI571诱导细胞凋亡作用。
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