论文摘要
大高良姜是姜科良姜属植物大高良姜Alpinia galanga（L.）Swartz的干燥根茎,其广泛分布于东南亚各国,在我国的广东、广西、云南、台湾等省区都有分布。在东南亚各国及我国的粤东地区,大高良姜作为调味料广泛用于民间风味食品及烹调中,也是重要的中药。ACA是大高良姜挥发性油中最主要的有效成分,具有抗癌、抗肿瘤、抗艾滋病毒、抗黄嘌呤氧化酶、抗氧化、抗溃疡、抗菌、抗结核病毒、杀虫等生物活性,体内体外实验证明:ACA是一种广谱的抗癌剂并且没有明显的副作用,因此引起了生物学家、病理学家、医学家、药物学家、营养学家和自由基化学家的广泛关注。本文以广西阳朔的大高良姜为实验材料,综合应用食品科学、有机化学、天然产物化学、分析化学、生物技术及现代仪器分析等一系列现代研究方法和技术手段,较为系统地研究了从大高良姜中提取纯化ACA,对ACA的含量测定、提取纯化、结构鉴定及抗菌活性进行了较深入的研究,为ACA用于新药开发的研究和作为功能性食品基料奠定了基础。主要研究内容与结论概括如下:1.探索并比较了乙醇回流法和超临界二氧化碳萃取法（SFE-CO2法）对大高良姜中的ACA的提取工艺。在单因素基础上采用正交L9（34）实验对乙醇回流提取大高良姜中的ACA的工艺条件进行了优化得出最佳工艺条件。最佳条件下得到:萃取物的得率为4.68%,其中ACA的纯度为27.15%,ACA含量为12.71mg/g。在单因素基础上采用正交L9（34）实验对SFE-CO2法提取大高良姜中的ACA的工艺条件进行了优化得出最佳提取条件。最优条件下得到:挥发油的得率为4.78%,其中ACA的纯度为78.11%,ACA含量为37.34mg/g。两种方法比较得出:SFE-CO2法提取的得率和ACA纯度均大于乙醇回流提取法,且操作方便,提取时间短,无溶剂残留,大大提高了萃取效率。SFE-CO2法提取大高良姜中的ACA明显优于乙醇回流法。2.对超临界二氧化碳萃取的大高良姜挥发油进行GC-MS和LC-MS分析,得出大高良姜挥发油主要含有ACA,且是同分异构体形式存在。并建立了从大高良姜挥发油中检测ACA的方法,分别应用了薄层色谱（TLC）和高效液相色谱（HPLC）技术对大高良姜的ACA进行定性定量的研究。TLC实验结果是:展开剂为正己烷:乙酸乙酯=85:15,ACA的Rf值为0.39。HPLC实验结果是:流动相为甲醇:水=50:50,检测波长为254nm,发现此方法精密度高,重现性,稳定性和回收率效果较好,适合大高良姜挥发油中ACA的定量检测。3.对超临界二氧化碳萃取的大高良姜挥发油中的ACA进行分离纯化和结构鉴定的研究,采用硅胶柱纯化并进行重结晶得到无色结晶物,最终得到纯度为99.6%无色结晶物,经过UV,IR,MS,1H和13CNMR光谱分析进行结构鉴定,确定为ACA。熔点测定得知ACA的熔点为67.3℃,热重分析可知其具有热不稳定性,ACA经过x-衍射可以看到其是以晶体的形式存在,没有非晶区。本研究的方法得到ACA简单,快速,产量高,产品质量好。4.对超临界CO2萃取前、后的大高良姜粉末主要成分的测定,结果表明:大高良姜中含有丰富的粗纤维,超临界萃取后物料理化成分变化不大,黄酮成分有了很大的提高,超临界萃取后物料可以进一步开发利用。5.进一步研究了ACA的抗菌活性,滤纸片法和试管连续稀释法对九种微生物的抑制性来评价ACA的体外抗菌活性,结果表明ACA具有显著的抗菌活性,抗细菌活性大于抗真菌活性,抗革兰氏阳性菌大于抗革兰氏阴性菌。