骨髓基质细胞移植兼用脑源性神经营养因子促进大鼠脊髓损伤修复的实验研究

论文摘要

目的:探讨骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells,BMSCs）移植兼用脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor, BDNF）促进大鼠脊髓半横断损伤修复的影响。方法:采用percoll分离法获取大鼠骨髓基质细胞,移植前72小时5溴-2脱氧尿核苷（Brdu）标记细胞核作为示踪标记。选择健康的Wistar大鼠48只,体重250—300g,雌雄不拘,随机分成四组, 采用腹腔戊巴比妥麻醉,作脊髓T12半横断损伤模型。损伤对照组（I组）:12只 ,脊髓半切后明胶内给予 DMEM 1 0μl; 局部BDNF治疗组（II组） :12只 ,明胶内给予BDNF 1 0 μl（33μg/ml）; BMSCs移植组（III组） :12只 ,明胶内给予体外培养纯化的BMSCs悬液 8μl,损伤上下各 1 mm处用无损伤玻璃针头 （尖端 50μm）移植 BMSCs悬液共 2μl（多点注射 ,每点 0.5μl）;BMSCs兼用BDNF移植组（IV组）:12只 ,移植BMSCs并联合应用BDNF。术后24h, 3天、1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周用斜板试验及改良Tarlov评分评价动物后肢运动功能恢复情况;术后8周,取材,进行HE、嗜银、免疫组化染色,用光镜及电镜观察移植后脊髓的形态结构变化及移植物存活情况;用分子量为200kD神经微丝（NF）、分子量为51kD胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）免疫组化活性的变化来评价移植对再生的影响。结果:免疫组化方法检测在脊髓病理切片中发现Brdu标记阳性BMSCs,移植物能很好地与宿主融合和存活。术后24小时四组神经功能评分比较P>0. 10,无显著性差异,术后2周8周,第IV组与其他各组比较P<0.05,具有统计学意义。说明移植细胞的大鼠后肢自主运动功能有显著的恢复,BMSCs和BDNF联合应用组对脊髓损伤的修复作用最强。结论:BMSCs移植可促进大鼠半横断脊髓结构和功能的恢复,联合应用BMSCs和BDNF在脊髓损伤修复治疗中具有协同作用。此方法为将来BMSCs作为组织工程细胞来治疗脊髓损伤提供线索。

论文目录

• 论文
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 实验结论
• 参考文献
• 附图
• 综述
• 正文
• 参考文献
• 个人简介
• 致谢