论文摘要
为了研究噬菌体裂解酶在体外裂解病原菌的条件,探索其用于疫区病原菌洗消的可行性。本实验利用PCR 方法扩增炭疽杆菌噬菌体裂解酶（γlysin）基因,克隆至大肠杆菌表达载体pET22b 中,经菌落PCR 筛选、序列测定和酶切鉴定证实表达载体pET22b-γlysin 构建成功。重组的噬菌体裂解酶在Escherichia.coli BL21（DE3）中获得了高表达,目的蛋白约占菌体总蛋白的40%,5 L 发酵罐中的产酶水平高达15 g/L。菌体经超声破碎,制备无细胞抽提液,Streamline SP和SP HP柱层析以及SephacrylS-100 凝胶过滤三步纯化,得到分子量为27 kD 单一条带的目的蛋白,薄层扫描分析显示其纯度大于93%。目的蛋白的收率为19.1%,纯化倍数为350。生物活性鉴定重组的γ噬菌体裂解酶具有特异性:可快速裂解炭疽杆菌,比活为1400 u/mg 左右;而对大肠杆菌、枯草杆菌及蜡样芽孢杆菌没有裂解活性.本实验还研究了温度、pH、不同离子及海藻糖对裂解酶活性的影响。
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