论文摘要
目的建立Wistar大鼠去卵巢后实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimental autoimmuneencephalomyelitis,EAE）动物模型,观察雌二醇（estradiol,E2）对EAE的治疗效果,及其对EAE中枢神经系统炎症浸润细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的影响,为临床应用E2治疗多发性硬化（mltiple sclerosis,MS）提供实验依据。方法1.四肢足掌皮内注射完全福氏佐剂一豚鼠全脊髓匀浆（CFA—GPSCH）,并辅以注射百日咳疫苗,诱导去卵巢Wistar大鼠建立EAE模型。将去卵巢雌性Wistar大鼠随机分为对照组、EAE组和E2治疗组,免疫后第0天E2治疗组肌肉注射E2500μg/kg·d,对照组及EAE组给予等体积的花生油注射,免疫后第20天停止注射。观察各组的发病情况至30天。放射免疫法测血清E2浓度。2.发病后三天处死动物,用HE染色观察中枢神经系统炎症细胞浸润程度,用3′末端脱氧核糖核苷酸转移酶（TdT）介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）法检测其细胞凋亡情况。免疫组化检测浸润细胞Bcl-2、Bax蛋白的表达。放射免疫法测血清E2浓度。结果1.对照组未见发病,体重增高最高值10.12±1.28。EAE组发病率为83.3%,潜伏期12.10±0.99天,症状持续时间14.00±1.15,临床评分最高值3.10±0.99,体重降低最高值28.50±1.85;E2治疗组发病率为33.3%,潜伏期为15.50±1.29,症状持续时间12.00±0.82,临床评分最高1.50±0.58,体重降低最高值22.68±1.53。与EAE组相比,E2治疗组发病率、潜伏期、症状持续时间、临床评分最高值、体重降低最高值差别均有统计学意义（p＜0.05）。对照组血清E2浓度为11.53±2.87pmol/l,EAE组血清E2浓度为10.62±1.35 pmol/l,E2治疗组血清E2浓度为78.25±0.46 pmol/l,对照组和EAE组血清E2浓度差别无统计学意义（p＞0.05）,E2治疗组与对照组、EAE组血清E2浓度比较有显著统计学意义（p＜0.01）。2.对照组大鼠未见明显异常病理改变。EAE组血管周围炎症浸润细胞数为70.19±20.79,凋亡细胞数为5.26±4.43,凋亡率6.97%;E2治疗组血管周围炎症浸润细胞数为42.35±24.38,凋亡细胞数为6.08±3.50,凋亡率13.34%,两组相比差异有明显统计学意义（p＜0.05）。EAE组每个浸润细胞Bcl-2的积分光密度为49.29±18.23,Bax的积分光密度为25.38±17.85,Bcl-2/Bax为2.28±0.65;E2治疗组每个浸润细胞Bcl-2的积分光密度为30.33±16.75,Bax的积分光密度为26.75±14.41,Bcl-2/Bax为1.24±0.13,两组相比,每个浸润细胞Bcl-2的积分光密度差异有统计学意义（p＜0.05）,Bax的积分光密度差异无统计学意义（p＞0.05）,Bcl-2/Bax差异有统计学意义（p＜0.05）。EAE组血清E2浓度为17.43±2.36 pmol/1,E2治疗组血清E2浓度为2983.21±162.78pmol/l,两组比较血清E2浓度有显著统计学意义（p＜0.01）。结论1.雌二醇可有效地抑制EAE的发病。2.雌二醇可能通过抑制EAE中枢神经系统血管周围炎性浸润细胞Bcl-2表达,降低Bcl-2/Bax的比值,从而提高炎性浸润细胞的凋亡率,减少炎性浸润细胞数目,从而减轻EAE的病情,这可能是E2治疗EAE的作用机制之一。
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