论文摘要
益生菌在促进人体健康和防止疾病发生中发挥着重要的作用。本论文从大量分离获得的乳酸菌菌株中,筛选具有降压特性的益生菌,并对其进行鉴定,为研究和开发具有降血压功能的益生菌产品奠定基础。（1）利用改良MRS、NPNL、TPY培养基,从9种样品中共分离到126株菌株,其中杆菌32株,球菌94株,通过形态观察、生理生化试验、共获得47株性能良好的产酸菌。（2）对47株产酸菌进行耐酸和胆汁盐试验。有7株供试菌株能在pH2.0的0.3%胆汁酸盐中存活超过6h,并以菌株C3和W4的耐受性最强。（3）对产酸菌进行了体外抑菌试验。通过测定,抑菌圈直径超过15mm的有2株,在12mm–15mm有7株,小于12mm有38株。其中菌株C3和W4的抑菌能力较对照菌株BB-12强。C3对埃希氏大肠杆菌和沙门氏菌的抑菌直径分别为17.9±1.6mm、16.6±1.2mm;W4对埃希氏大肠杆菌和沙门氏菌的抑菌直径分别为18.9±1.4 mm、17.9±1.6mm。（4）对产酸菌发酵乳的血管紧张素转换酶（Angiotensin I-Converting Enzyme,ACE）抑制率进行测定后发现,有6株菌对ACE的抑制率超过50%,其中C3菌株对ACE的抑制率最高。（5）对获得的耐酸和耐胆汁盐且具有较强的血管紧张素转换酶（ACE）抑制率的产酸菌C3和W4通过生理生化试验,结合API系列试剂条和16SrDNA序列同源性分析,其分别被鉴定为青春双歧杆菌（Bifidobacterium.adolescentis）和屎肠球菌（Enterococcus.faecium）。（6）对青春双歧杆菌C3的发酵特性进行了研究。通过研究发现,随着生物量的增加,发酵乳对ACE的抑制率也在增加,24h的发酵乳对ACE抑制率最大,为71.25%。随着时间的延长,青春双歧杆菌C3发酵乳的邻苯二甲醛（O-phthalaldehyde,OPA）指数有所增加,最高达0.43。（7）对青春双歧杆菌C3发酵乳血管紧张素转换酶抑制肽（ACEIP）的相对分子质量分布和ACE抑制率的关系进行了研究。采用凝胶过滤色谱法检测了青春双歧杆菌C3发酵24h时血管紧张素转化酶抑制肽相对分子质量分布范围,结果表明,相对分子质量分布在385Da～1782Da之间,其中相对分子质量在408Da处出现的洗脱峰ACE抑制率最大,为84.07%。（8）对青春双歧杆菌C3发酵乳ACE抑制肽的分离制备工艺进行了研究。结果是使用5K分子量的膜的超滤最佳条件为为:室温（30℃）、操作压力0.1Mpa,不需调节pH值。获得的超滤液的ACE抑制率比母液提高了19.47%;在凝胶过滤中,分别采用Sephadex G-25和Sephadex G-15对发酵乳清进行分离,其中Sephadex G-25可以分离出3个活性组分,这3个组分中以组分2和组分3的ACE抑制率最高（p<0.01）,其ACEIP的相对分子质量主要分布在1700Da以下;组分2和3浓縮后上Sephadex G-15分离后的结果与葡聚糖凝胶G-25分离图谱是一致的;比较SephadexG-15分离图谱与卡托普利标准品的SephadexG-15分离图谱后发现,发酵乳中ACEIP的分子量比卡托普利（217.29）标准品的分子量要大。（9）对发酵乳ACE抑制率的稳定性进行了研究。结果显示,发酵乳在4℃冰箱冷藏24h和冷藏48h后ACE抑制率分别降低了11.21%和19.28%;-20℃冷冻60天时ACE抑制率下降了1.7%;在90℃条件下加热20min后,ACE抑制率仅降低了1.32%（p﹤0.05）。（10）本实验菌株已经在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏（CGMCC）,保藏号为CGMCC No.1695,中国专利申请号为:200805011588.9,菌株名为青春双歧杆菌grx066。