PTEN基因联合奥沙利铂对胆管癌细胞生长抑制的研究

论文题目: PTEN基因联合奥沙利铂对胆管癌细胞生长抑制的研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 普通外科学

作者: 崔平

导师: 段体德,董坚

关键词: 基因,胆管癌细胞,生长抑制,奥沙利铂

文献来源: 昆明医学院

发表年度: 2005

论文摘要: 目的 探讨利用脂质体介导的转基因技术将抑癌基因PTEN转入人胆管癌细胞,联合化疗药物奥沙利铂(L-OHP),分别进行人胆管癌细胞(QBC939)体外培养和体内接种生长、观察、分析该基因对胆管癌细胞生长的抑制情况,探索人类胆管癌的生物治疗的可行性和方法。 方法 1.将携带PTEN基因的真核表达载体pBP-PTEN和不含该基因的空载体pBP-puro转化DH5α大肠杆菌中并扩增,提取和纯化质粒DNA,酶切、电泳测定。用Lipofectamine将pBP-PTEN和pBP-puro质粒转染胆管癌QBC939细胞,嘌呤霉素抗性克隆浓度筛选,挑选阳性细胞克隆、扩增培养。转染细胞分为pBP-PTEN-QBC组、空质粒pBP-QBC组,未转染组QBC细胞为对照组。2.绘制细胞生长曲线及四甲基氮唑盐法酶联光吸试验(MTT):观察转染PTEN基因前后QBC939细胞的生长情况,并绘制生长曲线。3.免疫组化:运用S-P免疫组化法,检测QBC939细胞转染前后PTEN阳性表达率。4.体外细胞侵袭力抑制试验:区带微孔膜分上下室的6孔培养板,上室分别按每孔细胞数为1×10~6/ml置入PTEN-QBC组(转染组)、QBC939对照组细胞悬液,并每组随机取两孔加入0.5%/L的奥沙利铂(L-OHP),下室中加入含趋化因子的无血清培养基,侵袭至膜下表面的细胞行HE染色,选5个400倍显微镜视野,统计各组细胞数,并以侵袭细胞的相对数目表示细胞的侵袭力。5.流式细胞分析仪:取细胞数各为2×10~7/ml的上述4组细胞,进行流式细胞仪检测,观测各组细胞的周期G1到S期的变化和细胞凋亡情况。6.透射电镜扫描:取QBC939对照组、空质粒pBP-QBC和转基因组PTEN-QBC细胞,分别观察PTEN基因转染前后QBC939细胞的形态及细胞微结构的变化。7.体内肿瘤生长抑制试验:将24只6周龄雌性BALB/c裸鼠随机分为4组,每组6只,分别命名为QBC和PTEN各两组,QBC两组共12只裸鼠,每只右前肢皮下接种细胞数为1×10~7/ml的对数生长期QBC939细胞,PTEN组12只相同

论文目录:

中文摘要

英文摘要

引言

第一部分 脂质体介导PTEN基因对人胆管癌细胞(QBC939)转染的研究

材料与方法

结果

讨论

结论

第二部分 PTEN基因转染后联合奥沙利铂对胆管癌细胞体外生长抑制的研究

材料与方法

结果

讨论

结论

第三部分 PTEN基因转染后联合奥沙利铂对胆管癌细胞裸鼠体内生长抑制的研究

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

中文详细摘要

英文详细摘要

附录1 中英文缩略词表

附录2 主要溶液的配制

致谢

综述1

综述2

在读期间基本情况

发布时间: 2005-12-07

参考文献

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