论文题目: 卵母细胞激活技术与胚胎干细胞分离、培养
论文类型: 博士论文
论文专业: 妇产科学
作者: 鹿群
导师: 陈子江
关键词: 小鼠,卵母细胞,化学激活,孤雌激活,孤雌生殖干细胞,人卵母细胞,钙离子载体,荧光原位杂交,嘌呤霉素,卵母细胞激活,饲养层细胞,细胞,分化
文献来源: 山东大学
发表年度: 2005
论文摘要: 人胚胎干细胞因在再生医学和人胚胎早期发育研究等方面潜在的应用价值而成为近年来生命科学的研究热点,但是人胚胎干细胞研究面临着严重的伦理学问题和资源匮乏的限制。本课题围绕卵母细胞激活和胚胎干细胞分离、培养这两大主题,共进行四部分实验研究,期望在避免或减少伦理学问题的情况下,为人胚胎干细胞研究提供较为充足的胚胎来源,为成功建立人胚胎干细胞系奠定实验基础。现分部叙述如下: 第一部分 小鼠卵母细胞孤雌激活的实验研究 目的:探讨化学激活剂对小鼠卵母细胞的孤雌激活作用以及分离培养孤雌生殖干细胞的可行性。方法:采用有重复的三因素三水平的正交设计,观察乙醇对小鼠卵母细胞的激活作用。乙醇联合6-DMAP/嘌呤霉素对小鼠卵母细胞实施激活;采用钙离子载体A23187(calcium ionophore A23187,A23187)联合6-DMAP/嘌呤霉素对小鼠进行激活处理。观察各种化学激活剂对小鼠卵母细胞激活效果和孤雌胚胎的发育潜能。将孤雌囊胚接种于饲养层细胞上,观察孤雌胚胎在饲养层细胞上的生长情况。结果:适于小鼠卵母细胞激活和孤雌胚发育的卵龄是9小时;乙醇浓度为7%;处理时间是5分钟。但是随着卵龄增大及乙醇浓度提高,卵母细胞的碎裂率明显增加。乙醇联合6-DMAP/嘌呤霉素后,孤雌胚胎发育潜能显著提高。A23187能激活小鼠卵母细胞;与6-DMAP/嘌呤霉素联合应用能有效地提高孤雌胚胎的发育潜能。A23187联合6-DMAP激活的卵母细胞能发育到囊胚阶段,接种于饲养层后,孤雌囊胚能够贴壁生长,分离出干细胞克隆,但是孤雌生殖干细胞生长能力明显较正常胚胎的低下。结论:乙醇、钙离子载体A23187或联合6-DMAP/嘌呤霉素均能有效地激活小鼠卵母细胞,联合应用能提高孤雌
论文目录:
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符号说明
论文正文:卵母细胞激活技术与胚胎干细胞分离、培养
序言
第一部分 小鼠卵母细胞孤雌激活的实验研究
1、化学激活剂对小鼠卵母细胞孤雌激活作用的实验研究
前言
材料与方法
结果
讨论
结论
2、小鼠孤雌生殖干细胞的分离、培养
前言
材料与方法
结果
讨论
结论
附图
参考文献
第二部分 钙离子载体A23187联合6-DMAP对人体外成熟卵母细胞的孤雌激活作用
前言
材料与方法
结果
讨论
结论
附图
参考文献
第三部分 钙离子载体 A23187联合嘌呤霉素对 ICSI受精失败的人卵母细胞激活的实验研究
前言
材料与方法
结果
讨论
结论
附图
参考文献
第四部分 小鼠胚胎干细胞的分离、培养
1、小鼠胚胎干细胞培养体系的优化筛选
前言
材料与方法
结果
讨论
结论
2、小鼠胚胎干细胞的分离、培养与鉴定
前言
材料与方法
结果
讨论
结论
附图
参考文献
小结
附录1 试剂和仪器
附录2 主要试剂配制方法
致谢
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发布时间: 2005-10-17
参考文献
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