论文摘要
兰科植物在世界各地分布极广,我国拥有极其丰富的兰花种质资源。兰属（Cymbidium）隶属于兰科（Orchidaceae）,兰属中春兰、蕙兰、建兰、墨兰等传统的国兰品种中蕴藏有极为丰富的优良基因,大部分兰属植物的原生种都被用于培育大花蕙兰新品种,并已培育出了一些带有国兰特色的大花蕙兰品种。但是目前兰属的品种选育仍然依靠从野生种中选择的传统观念和做法,兰花的新品种培育工作仍有待深入,人工培育的具有经济价值的新品种则更少之又少,随着兰花产业的发展,兰属内的种间远缘杂交育种必然会培育出大量优良品种。通过种间远缘杂交可以提高观赏价值、改变或延长花期、增强品种抗性等性状,可能会培育出具有典型国兰特征,又具有大花蕙兰优点的品种。兰花杂交育种,特别国兰的杂交应用对我国兰花资源在兰花新品种培育具有重要地位。国内外已有部分关于兰属种间杂交研究的报道,但对于兰属多亲本杂交及其杂种胚培养技术尚无深入的研究。本研究以大花蕙兰与墨兰杂交选育成的杂交兰品种‘韩国桃花’为母本,以蕙兰为父本进行杂交,并对不同发育阶段的杂种胚进行离体培养,探讨远缘杂种胚萌发及杂交后代增殖和植株再生技术,同时对发育过程的组织结构和生理生化进行研究,研究结果如下:1.‘韩国桃花’×蕙兰杂交种子的无菌萌发经历了:种子-原球茎-根状茎-根状茎分化成苗完整过程,种子萌发率与果荚的成熟度有关,授粉后240d的种胚具有较好的萌发能力,在1/2MS+BA0.5mg·L-1+NAA2.0mg·L-1的培养基上萌发效果较好;NAA1.0mg·L-1+6-BA1.0 mg·L-1组合能有效地促进杂交兰根状茎分化成苗,促进根状茎茎端绿芽分化时,70d是较佳的继代培养时间。2.杂交后萌发的种子可以通过原球茎和根状茎2条途径增殖;1/2MS为杂交兰原球茎增殖和分化较佳培养基,增殖培养时固液交替效果优于固体培养和液体培养,基本培养基添加BA0.5mg·L-1和NAA2.0 mg·L-1适于原球茎增殖,培养30d后增殖系数可达4.25,而0.5mg·L-1～1.0mg·L-1NAA适宜原球茎的发育和植株再生,添加100 ml·L-1椰子汁对原球茎增殖效果较好;1/2MS为根状茎茎增殖和再生较佳培养基,增殖培养时固液交替效果同固体培养差异较小但优于液体培养,根状茎的增殖以NAA:BA=2:1较适宜,培养40d后增殖系数可达6.0以上;当NAA浓度为1.0 mg·L-1时,根状茎发育及植株再生效果佳,培养70d后,超过80%的根状茎茎端分化成苗。活性炭1.0g·L-1促进根状茎增殖,添加100 ml·L-1椰子汁对根状茎增殖效果较好。杂交后代通过原球茎和根状茎均可获得再生植株,且形态无明显差别。3.原球茎和根状茎形成和发育过程的组织学研究表明,原球茎和根状茎的解剖结构都有由外到内分为表皮、皮层及维管束三个部分,原球茎阶段较根状茎阶段淀粉含量多。原球茎（类原球茎）其通过顶端分生组织下方无分生能力的薄壁细胞中脱分化形成分生组织最后发育为新的原球茎进行增殖,而根状茎的表皮和皮层细胞可分裂形成侧生分生组织,芽可以在原球茎顶端、根状茎节部和根状茎的顶端发生。杂交兰组织培养中先后产生的原球茎和根状茎为典型的营养繁殖器官。4.可溶性糖、淀粉的累积和可溶性蛋白质累积变化及蛋白质组分的变化与发育发生潜能的实现是密切相关的,在两个发育途径中可溶性糖和淀粉含量均呈现降低的变化趋势,且原球茎分化途径含量高于根状茎途径,可溶性蛋白质含量均表现出先下降再上升的趋势,在原球茎和根状茎分化过程中,SOD、POD和CAT酶是相互配合来调节植物生理过程变化的协调。完整植株的生理指标无显著差异。