论文摘要
目的肝脏具有强大的再生能力,肝再生是一个极其复杂、多因素参与调控的过程,70%肝部分切除术已成为制作肝再生模型的最常用方法。将肝移植技术运用于肝肿瘤切除的原位低温灌注肝切除术、半离体和离体肝切除余肝再植技术无疑是解决肝热缺血时间限制及解剖显露困难这一难题的优良选择。肝再生细胞凋亡的可能机制和线粒体通透性改变的调节机制有关,缺血再灌注损伤在器官移植中不可避免。本实验旨在研究肝再生的时相性,验证肝再生过程中细胞凋亡活性的变化与线粒体通透性改变之间的关系及CsA预处理在肝脏缺血再灌注损伤中的保护作用。方法首先采用Higgin法建立70%肝切除术和原位低温灌注70%肝切除术自体肝移植模型,对大鼠肝脏肝再生度指标和肝脏重量增生率指标进行测定,免疫组化检测PCNA和Ki-67,反应术后肝再生的时相性。选择CsA预处理肝脏,观察其对细胞凋亡的影响和cytC、Bax、Bcl-2和Caspase-3表达的影响;及在肝脏缺血再灌注损伤中的TNF-a、ICAM-1、HO-1和iNOS表达的影响。结果1在定型手术中,供肝的热缺血时间为0.5-1min,冷缺血时间为（2.25±1.27）min（1-4min）,无肝期平均为（3.14±1.56）min（2-5min）。手术成功率为100%。2两组大鼠残肝能在术后3天肝脏再生基本达到原来的一半,1周基本恢复原来肝脏大小。术后PCNA和Ki-67表达都明显增高,但原位低温灌注70%肝切除术自体肝移植组PCNA-LI和Ki-67-LI的高峰值较70%肝切除术组延后+24h。3 CsA能特异性抑制线粒体可通透性转化小孔开放的作用,PC组在再灌注后2h及6h cytC的表达较NS组明显降低,再灌注后6h、24h,PC组大鼠肝组织Caspase-3蛋白的表达水平明显低于NS组。PC组与NS组在再灌注后三个时点的Bcl-2/Bax的表达无显著性差异。4再灌注后2h、6h,PC组大鼠肝组织TNF-a和ICAM-1蛋白的表达水平明显低于NS组,再灌注后6h,PC组大鼠肝组织TNF-a和ICAM-1mRNA的表达水平明显低于NS组;再灌注后6h,PC组大鼠肝组织iNOS蛋白的表达水平明显低于NS组（P＜0.05）;再灌注后6h,PC组大鼠肝组织HO-1蛋白的表达水平明显高于NS组（P＜0.05）。结论1 70%肝切除术和原位低温灌注70%肝切除术自体肝移植模型稳定可靠,可为肝移植的基础及临床相关研究提供较为理想的研究手段。2肝脏具有强大的再生能力,肝再生看重肝脏功能的恢复,而并非绝对的形态上的恢复,Ki-67和PCNA是反映肝再生细胞增殖活性的有效指标。3 CsA抑制MPTP开放,减轻了线粒体内的凋亡介质如cytC等释放,抑制Caspase的级联反应,一定程度上抑制了凋亡,CsA不能促进抗凋亡基因Bcl-2的表达或抑制促凋亡基因Bax的表达。4 CsA减轻肝移植I/R损伤的机制与抑制TNF-a及ICAM-1的表达有关,CsA能提高热休克蛋白HO-1的表达和抑制iNOS的表达,可以有效地减轻肝移植I/R损伤。
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