花青素诱导K562、NCI-H460细胞凋亡及抑制裸鼠移植瘤生长的研究

论文摘要

目的:研究花青素诱导K562、NCI-H460细胞的凋亡作用。方法:体外培养K562、NCI-H460细胞,用25、50、100和200μg/ml的花青素处理后,MTT法检测花青素对细胞增殖的抑制作用和半数抑制浓度（IC50）;台盼蓝染色法检测对细胞活力的影响;倒置显微镜下观察细胞形态学的变化;琼脂糖凝胶电泳观察DNA断裂的梯形条带;Hoechst 33258荧光染色观察细胞核形态的改变;流式细胞术测细胞的凋亡率和细胞周期的分布。结果: 25～200μg/ml花青素可以使K562、NCI-H460细胞的活力明显下降;细胞的形态发生不同的变化;花青素（25、50、100和200μg/ml）作用K562、NCI-H460细胞72 h的细胞增殖抑制率分别为:16.0、33.6、53.9和65.1%;23.0、38.1、50.6和59.1%;花青素对K562、NCI-H460细胞的IC50分别为89.1和90.8μg/ml;25～200μg/ml的花青素对K562、NCI-H460细胞具有明显的增殖抑制作用,其抑制作用呈剂量和时间依赖性。50～200μg/ml的花青素处理K562、NCI-H460细胞72 h,DNA琼脂糖凝胶电泳有典型的梯形条带;Hoechest33258荧光染色可观察到核浓缩及核碎裂等典型的细胞凋亡特征;流式细胞术结果显示在DNA直方图上可见低于G1期的“亚G1峰”即凋亡峰,随着浓度的增大凋亡峰增大,且G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,200μg/ml的花青素对K562、NCI-H460细胞的凋亡率分别为57.4、27.8%。结论:25～200μg/ml花青素可以抑制K562、NCI-H460细胞的增殖,抑制作用呈剂量和时间依赖性。50～200μg/m花青素可以诱导K562、NCI-H460细胞的凋亡,呈剂量依赖性,细胞被阻止于G0/G1期。诱导K562、NCI-H460细胞凋亡可能是花青素抗肿瘤的机制之一。目的:研究花青素在体内对K562、NCI-H460细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用。方法:采用K562、NCI-H460细胞株和瘤块建立裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为模型组、治疗组和阳性对照组。模型组给予生理盐水20 ml/（kg.d）,治疗组分别给予50、100和150 mg/（kg.d）花青素灌胃给药15天,阳性对照组给予20 mg/kg环磷酰胺每隔一天灌胃给药8天。停药后继续饲养一个月。期间观察各组裸鼠肿瘤的生长情况,测量肿瘤的体积,绘制肿瘤的生长曲线,计算肿瘤的生长抑制率,观察裸鼠带瘤的生存情况。结果:K562细胞株和瘤块的裸鼠移植瘤成功率极低,NCI-H460细胞株和瘤块的移植成功率达100%。花青素对NCI-H460裸鼠移植瘤的生长具有明显的抑制作用,给药结束时,中剂量组和高剂量组的抑瘤率达47.1%和58.9%。裸鼠带瘤生存情况差,精神状态差,行动迟缓,消瘦明显。结论:K562细胞株和瘤块的裸鼠移植瘤成瘤率极低,NCI-H460细胞株和瘤块的移植成瘤率达100%。花青素对NCI-H460裸鼠移植瘤的生长具有抑制作用。花青素对NCI-H460细胞裸鼠移植瘤的生长有一定预防作用。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 引言
• 第一部分 花青素诱导k562、NCI-H460 细胞凋亡的实验研究
• 技术路线
• 材料、方法和结果
• 讨论
• 第二部分 花青素抑制k562、NCI-H460 细胞裸鼠移植瘤生长的研究
• 材料、方法和结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 花青素抗肿瘤的研究进展
• 攻读学位期间本人出版或公开发表的论著、论文
• 附录 缩略词表
• 致谢