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肠杆菌科细菌质粒介导的AmpC β-内酰胺酶的研究

2020-12-07阅读(438)

肠杆菌科细菌质粒介导的AmpC β-内酰胺酶的研究

论文摘要

细菌耐药已成为全球公共卫生的一大难题。肠杆菌科细菌为医院内感染的常见病原菌,尤其是携带有AmpCβ-内酰胺酶的细菌,对几乎所有β-内酰胺类抗生素耐药,且对β-内酰胺酶抑制剂不敏感,对头孢西丁亦耐药。目前没有国际统一的检测标准,没有临床大规模监测数据,人类对其还缺乏足够的认识。这类基因被质粒获取后,可以在不同菌种之间传播,加之各种可移动基因原件的参与,使耐药基因的传播复杂多样,给感染控制带来极大的困境。本研究搜集澳大利亚西悉尼4家医院,3年内对头孢西丁耐药的大肠杆菌和肺炎克雷伯菌83株,用多重PCR的方法检测不同类型的ampC耐药基因,测序确定基因分型;脉冲场凝胶电泳（PFGE）进行菌株分型;质粒接合实验及电穿孔获取质粒,然后应用质粒不相容分型PCR方法进行质粒分型;应用PCR mapping的方法了解该基因上下游结构,从基因水平了解该耐药基因的传播机制。结果:83株头孢西丁耐药的大肠杆菌和肺炎克雷伯菌中14株携带有ampC基因;测序及基因库比对结果显示7株为blaDHA-1基因,5株为blaCMY-2基因。且发现两个新型耐药基因,一个已经命名为bla（CMY-42）,另一株blaDHA-1-like基因还需进一步深入研究。PFGE结果显示各菌株均为不同类型;发现几种不同类型质粒参与耐药基因的传播;除一株外,所有blaDHA-1-like基因都连接有qnrB4基因。blaDHA-1基因与ISCR1或IS26相连,blaCMY-2及blaCMY-42基因均与ISEcp1及IS26相连;pJIE092可能为pJIE142及基因库中收录的来自法国等国家基因结构的前体。结论:在澳大利亚西悉尼的质粒介导的ampC基因为已知的世界上较为流行的blaDHA-1及blaCMY-2基因型,并发现携带一种新型ampC耐药基因blaCMY-42,及另外一种正进一步研究的新型ampC耐药基因blaCMY-42基因。并非单一克隆传播,亦非单一质粒传播,有多种移动基因元件参与ampC耐药基因的传播。并发现一种相对古老的基因结构。

论文目录

  • 内容提要
  • 缩略词表
  • 前言
  • 第1章 综述 质粒介导的AmpC β-内酰胺酶研究进展
  • 1.1 AmpC酶的发现
  • 1.2 质粒介导的AmpC酶的发现
  • 1.3 AmpC酶的诱导性
  • 1.4 质粒介导的AmpC酶的传播机制
  • 1.5 产AmpC酶菌种的耐药特征
  • 1.6 AmpC β-内酰胺酶的检测方法
  • 1.7 产AmpC酶耐药菌的治疗
  • 1.8 小结
  • 1.9 参考文献
  • 第2章 质粒介导的AmpC酶的基因型检测
  • 2.1 材料和方法
  • 2.1.1 临床分离菌株
  • 2.1.2 标准菌株
  • 2.1.3 质控菌株
  • 2.1.4 培养基、与试验药品
  • 2.1.5 主要实验仪器
  • 2.1.6 药物敏感性实验
  • 2.1.7 质粒介导的ampC基因的检测
  • 2.2 结果
  • 2.2.1 质粒介导的AmpC酶的检出率
  • 2.2.2 测序
  • 2.3 讨论
  • 2.3.1 质粒介导的AmpC酶基因型
  • 2.3.2 pAmpC酶检测
  • 2.3.3 DNA序列测定
  • 第3章 质粒介导的AmpC酶菌株同源性分析
  • 3.1 材料和方法
  • 3.1.1 菌株
  • 3.1.2 培养基
  • 3.1.3 应用酶
  • 3.1.4 PFGE用胶
  • 3.1.5 试剂
  • 3.1.6 主要仪器
  • 3.1.7 脉冲场凝胶电泳
  • 3.2 结果
  • 3.3 讨论
  • 第4章 AmpC酶质粒不相容性分型
  • 4.1 材料和方法
  • 4.1.1 菌株来源
  • 4.1.2 培养基
  • 4.1.3 主要仪器
  • 4.1.4 引物
  • 4.1.5 质粒接合实验
  • 4.1.6 电感受态细胞的制备
  • 4.1.7 电穿孔
  • 4.1.8 碱裂解法提取质粒DNA
  • 4.1.9 inc/rep（incompatibility/replicon typing,质粒不相容性分型）多重PCR
  • 4.2 结果
  • 4.3 讨论
  • 第5章 ampC基因背景的研究
  • 5.1 材料和方法
  • 5.1.1 菌株来源
  • 5.1.2 培养基
  • 5.1.3 主要仪器
  • 5.1.4 引物
  • 5.1.5 GenBank中参考序列基因组结构
  • 5.1.6 PCR mapping
  • 5.2 结果
  • 5.2.1 PCR产物及引物在GenBank参考基因结构序列上的位置模式图
  • 5.2.2 本实验研究携带DHA质粒基因结构对比简易模式图
  • 5.2.3 本实验研究携带CMY质粒基因结构对比简易模式图
  • 5.3 讨论
  • 第6章 结论及创新点
  • 参考文献
  • 附录
  • 在学期间学位论文相关的科研成果
  • 致谢
  • 中文摘要
  • ABSTRACT

    • 相关论文文献

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