一、野外自然与室内人工血吸虫感染性钉螺尾蚴感染小鼠的观察（论文文献综述）
王丽萍[1]（2021）在《基于LFD-RPA的主要肠道血吸虫核酸快速可视化检测方法的建立及初步评价》文中研究表明当前我国正处于消除血吸虫病的攻坚阶段,日本血吸虫病疫情整体处于极低水平,但境外输入性病例时有报道,迫切需要更加快捷、敏感的检测方法,用于病例诊断或风险识别。目的:结合侧流层析试纸条（Lateral flow dipstick,LFD）和重组酶聚合酶扩增（Recombinase polymerase amplification,RPA）方法,建立能简单、快速识别日本血吸虫、曼氏血吸虫核酸的可视化检测技术,初步评价其对血吸虫中间宿主或终宿主感染早期的检测价值,并通过试剂、时间的折算,分析成本投入情况。方法:以日本血吸虫SjR2和SjG55A作为靶基因,结合Primer Premier 5软件及手工辅助设计引物,通过简易检出限、特异性确定引物序列,初步建立RPA检测方法。以RPA检测为基础,设计探针,确定最佳反应条件,初步建立LFD-RPA检测方法。以PCR方法为平行对照,评价建立检测方法的最低检出限、敏感性、特异性及不同终止方式检测结果。制备不同比例混合的阳性钉螺和阴性钉螺基因组,评价LFD-RPA方法的最低检出混合度。分别取毛蚴感染后不同时期钉螺样本,用解剖镜检法判断钉螺感染情况,提取钉螺样本DNA,评价LFD-RPA方法对钉螺不同感染阶段的血吸虫核酸检测能力,进行RPA、PCR的平行检测。LFD-RPA方法检测现场采集的钉螺样本,RPA、PCR为平行对照,评价LFD-RPA方法的检测效果。以曼氏血吸虫SmCOX1为靶基因,结合Primer Premier 5软件、手工辅助设计筛选引物,确定最终引物序列,初步建立RPA检测方法。以RPA检测为基础,设计探针,确定最佳反应条件,初步建立LFD-RPA检测方法。以文献中针对曼氏血吸虫Sm1-7基因设计的引物为基础,设计特异性探针,探索最佳反应温度及时间,建立LFD-RPA检测方法。以PCR为平行对照,评价建立方法的最低检出限及与特异性。建立40尾、80尾曼氏血吸虫尾蚴梯度感染小鼠的动物模型（简称“40尾组”、“80尾组”）,并于感染后不同时间收集小鼠粪便及血清,提取DNA,用PCR、RPA、LFD-RPA方法进行平行检测,全面评价LFD-RPA方法检测曼氏血吸虫早期感染的效能。随后,收集本实验室常用的血吸虫核酸检测生物学技术的基础数据,包括需要的试剂盒或主要试剂的具体名称、单盒价格、单盒反应次数以及来源。计算不同检测方法的每个样本投入成本,包括每个样本检测所需的试剂成本、劳动力成本。以每个样本投入试剂成本、劳动力成本为基础,在设置阴参、阳参的单个样本检测情况下,计算每次检测投入试剂成本、劳动力成本。同时,将96个反应作为不同检测方法批量检测总量。计算批量检测情况下,每个样本检测投入试剂成本、劳动力成本。并按照实验所需仪器数量将每种方法的技术要求划分为简单、一般、复杂、极复杂四个等级,对LFD-RPA和其他核酸检测方法的成本和技术要求进行比较分析。结果:成功建立了以日本血吸虫SjR2、SjG55A为靶基因的LFD-RPA检测方法以及以曼氏血吸虫SmCOX1、Sm1-7为靶基因的LFD-RPA检测方法,各方法的最优反应参数均为39℃、20min。冰上静置、滴加DNA提取液或酚氯仿三种终止LFD-RPA反应的方式对检测结果无影响。以SjR2、SjG55A为靶基因建立的LFD-RPA方法对含有日本血吸虫靶基因的质粒和成虫基因组最低检出限分别为1copies/μl、102copies/μl和1fg/μl、10fg/μl,SjR2-LFD-RPA更佳,优于对应RPA、PCR方法。SjG55A-LFD-RPA方法与曼氏血吸虫、阳性双脐螺、埃及血吸虫、华支睾吸虫、大片吸虫、卫氏并殖吸虫基因组DNA均无交叉反应。SjR2-LFD-RPA方法和埃及血吸虫、华支睾吸虫、大片吸虫、卫氏并殖吸虫基因组DNA无交叉反应,但可检出曼氏血吸虫、阳性双脐螺,提示与曼氏血吸虫有交叉反应。SjR2-LFD-RPA、SjG55A-LFD-RPA分别能最低检出2000只、1500只阴性钉螺中的1只阳性钉螺,最低检出混合度均高于对应RPA、PCR。SjR2-LFD-RPA、SjR2-RPA、PCR方法均可检出20组1:50的混合阳性钉螺,3中方法的敏感性均为100%。检测日本血吸虫实验室感染钉螺发现,血吸虫感染前6w的钉螺均镜检阴性,自7w出现镜检阳性钉螺,7～11w钉螺镜检阳性率分别为10%、30%、20%、40%、30%;SjR2-RPA在钉螺感染后的1d、3d、5d、1～11w 的检测阳性率分别为 90%、70%、50%、70%、60%、70%、60%、50%、20%、30%、70%、50%、50%、50%。SjR2-LFD-RPA 在钉螺感染后的1d、3d、5d、1～11w 的检测阳性率分别为 90%、80%、70%、70%、60%、60%、70%、70%、30%、30%、70%、50%、50%、50%。经统计学分析发现,SjR2-LFD-RPA、PCR、RPA的总检出率高于解剖镜检法。对现场采集共1550只钉螺的31管钉螺混合DNA的检测结果显示,SjR2-LFD-RPA的检出率为12.90%,其他方法均为阴性。建立的SmCOX1-LFD-RPA对质粒、曼氏血吸虫成虫基因组DNA检出限达到 10copies/μl、1fg/μl,均高于对应 RPA 及 PCR。建立的 Sm1-7-LFD-RPA 对质粒、成虫基因组DNA的检出限更高,达到1copies/μl、1fg/μlSmCOX1-LFD-RPA、Sm1-7-LFD-RPA对曼氏血吸虫、阳性双脐螺特异,与埃及血吸虫、日本血吸虫、阳性钉螺、华支睾吸虫、大片吸虫、卫氏并殖吸虫无交叉反应。检测曼氏血吸虫尾蚴感染小鼠模型的样本发现,不管是40尾组还是80尾组,SmCOX1-RPA和PCR对感染后1～8w的混合血样、混合粪样均无阳性结果出现。SmCOX1-LFD-RPA、Sm1-7-LFD-RPA检测40尾组混合血样和混合粪样时,均是自感染后3w开始出现较浅条带,随着感染时间的增加检测条带越来越明显,分别在感染后第8w和第6～8w时条带颜色达到最深;检测80尾组混合血样和混合粪样时,SmCOX1-LFD-RPA、Sm1-7-LFD-RPA均是自1w开始出现较浅条带,1～8w期间条带颜色逐渐变深,感染后第6～8w的条带颜色达到最深。总体上,Sm1-7-LFD-RPA的条带颜色要比SmCOX1-LFD-RPA的明显清晰一些。不同检测方法的成本比较及分析中,计算每次检测总成本后发现,PCR（453 RMB/次检测）>LFD-RPA（400RMB/次检测）>冻干粉态RPA（330RMB/次检测）>LAMP（300RMB/次检测）、液态RPA（300RMB/次检测）。每次检测时间排序为:PCR（2～2.5 h/次检测）>RPA（0.8～1 h/次检测）>LAMP（0.5～1 h/次检测）>LFD-RPA（0.4～0.6h/次检测）。以96个反应为一批量检测,计算不同检测方法的每批检测时间为:PCR（2～2.5 h/批检测）>RPA（3.2～4 h/批检测）>LAMP（2～4h/批检测）>LFD-RPA（1.6～2.4h/批检测）。批量检测情况下,每个样本检测投入总成本情况:LFD-RPA（112.77 RMB/批量每个样本）>冻干粉态RPA（61.92 RMB/批量每个样本）>LAMP（60.64 RMB/批量每个样本）>液态RPA（51.06 RMB/批量每个样本）>PCR（5.81 RMB/批量每个样本）。按是否需要特殊仪器设备分析实验操作人员技术要求,PCR检测方法和RPA归为“复杂”,而LAMP检测方法和LFD-RPA检测方法“简单”。结论:本研究建立了日本血吸虫、曼氏血吸虫核酸检测LFD-RPA技术,具有较低检出限,该方法操作简单,结果获取方式直接。SjG55A-LFD-RPA可用于日本血吸虫感染混合钉螺的检测,SjR2-LFD-RPA对曼氏血吸虫有交叉反应。基于SmCOX1、Sm1-7靶基因建立的LFD-RPA检测方法具有较低检出限,和其他虫种无交叉反应,有望用于曼氏血吸虫早期感染宿主识别。LFD-RPA作为较新的核酸检测技术,目前检测成本较高,但由于操作简便、敏感性高、特异性强,今后用于血吸虫病现场检测及风险监测有广阔的应用前景。
王盛琳[2]（2020）在《重组酶聚合酶扩增（RPA）技术检测日本血吸虫核酸方法的建立与初步评价》文中进行了进一步梳理目的:系统评价各种日本血吸虫核酸检测技术的诊断价值,并采用综合评价较高的重组酶聚合酶扩增（recombinase polymerase amplification,RPA）技术,建立一种特异、敏感、快捷的日本血吸虫核酸检测方法,并初步评价其应用于感染早期检测的潜在价值。方法:计算机检索1990年1月-2019年6月中国知网、万方、ScienceDirect和PubMed数据库中公开发表的与日本血吸虫核酸检测相关的文献,并结合手工检索和参考文献追溯法以最大程度地保证文章的查全。严格按照纳入与排除标准对文献进行筛选,纳入符合条件的文献并提取其中相关数据,采用Meta分析法对各种核酸检测技术的诊断价值进行综合评价。选择日本血吸虫Sj28S基因片段为靶序列,应用手工筛选法并辅以Primer Premier 5软件设计引物,进行温度、时间的优化以确定最佳反应条件,构建基于基础反应体系的RPA检测方法。提取日本血吸虫及其他寄生虫基因组DNA评价所建立方法的特异性。评价方法的敏感性,并与PCR和LAMP法的敏感性进行比较。此外,评价方法对血吸虫不同虫期基因组DNA的检出性能。制备血吸虫阳性钉螺及阴性钉螺不同混合比例的DNA样本,评价RPA方法的最低检出混合度和稳定性。建立5条、10条、20条、40条尾蚴梯度感染小鼠的动物模型（不同组别分别简称为“5尾组”、“10尾组”、“20尾组”、“40尾组”）,并于感染后第3d、lw、2 w、3 w、4 w、5 w、6 w收集小鼠粪便及血清样本,编号后进行冷冻保存。毛蚴攻击感染钉螺,于感染后第1 d、3 d、5 d、1 w、2w、3w、4w、5w、6w、7w、8w、9w、10 w、11 w分别收集10只钉螺样本,解剖镜检后进行冷冻保存。提取小鼠和钉螺样本的DNA,进行PRA与PCR两种方法的平行检测,综合评价RPA方法检出血吸虫早期感染的效能。结果:Meta分析共纳入19篇文献,其中中文文献5篇、英文文献14篇;共24组研究,其中17组研究涉及变温扩增技术与金标准的比较、7组研究涉及等温扩增技术与金标准的比较。文献质量评价结果表明,所纳入文献总体偏倚较小;Deek漏斗图提示变温扩增技术相关文献可能存在发表偏倚。变温扩增技术各研究之间存在非阂值效应引起的异质性,采用随机效应模型对合并效应量进行分析,结果显示:检测日本血吸虫病的综合灵敏度为0.81（95%CI:0.79-0.83）、特异度为0.73（95%CI:0.7]-0.74）、SROC曲线下面积为0.944 3。等温扩增技术各研究之间不存在异质性,采用固定效应模型对合并效应量进行分析,结果显示:检测日本血吸虫病的综合灵敏度为 0.96（95%CI:0.94-0.98）、特异度为 0.95（95%CI:0.94-0.97）、SROC 曲线下面积为0.989 9。构建的RPA方法可成功地扩增出日本血吸虫216 bp大小的目的基因片段。RPA的最佳反应条件最终选择为390C、20 min。该方法与曼氏血吸虫、埃及血吸虫、单尾尾蚴感染钉螺、华支睾吸虫、大片吸虫、卫氏并殖吸虫和牛带绦虫及阴性钉螺基因组DNA均无交叉反应。RPA法对于日本血吸虫成虫基因组的最低检出限为100 fg/μl,针对重组质粒的最低检出限为100拷贝/μl,且敏感性高于普通PCR和LAMP法。RPA法对日本血吸虫不同发育阶段的基因组DNA样本进行检测,各虫期均能被准确检出。应用建立的RPA方法检测阳性钉螺及阴性钉螺不同混合比例的DNA样本,结果显示,最低检出比例为1:1000。重复性试验结果显示,该方法重复性好且准确性高。动物模型结果显示,RPA法对20尾组小鼠可在第4 w检出粪便DNA阳性,10尾组和40尾组均可在第5 w检出粪便DNA 阳性,5尾组的低感染组仅在第6 w检出阳性。PCR方法对10尾组、20尾组、40尾组小鼠均可在第5 w检出粪便DNA阳性,5尾组仅可在第6 w检出粪便DNA阳性。针对小鼠血清样本的检测结果如下,RPA方法检测5尾组小鼠血清时于第5 w、6 w检出阳性结果,10尾小鼠血清于第2w、4w、6w检出阳性结果,20尾组小鼠血清于第3w、4w、5w、6w检出阳性结果,40尾组小鼠血清于第3d、lw、2 w、4 w、5 w、6 w均检出阳性结果。PCR法检测5尾组、10尾组小鼠血清时未检出阳性结果,20尾组小鼠血清于第4 w检出阳性结果,40尾组于第6 w检出阳性结果。钉螺的试验结果显示,压碎镜检法在感染第6w及之前均未观察到阳性结果,于感染第7w开始观察到血吸虫的子胞蚴结构。压碎镜检法对钉螺每个时间点检出的阳性率分别为:0%、0%、0%、0%、0%、0%、0%、0%、0%、10%、30%、20%、40%、30%;RPA 法的阳性率分别为:80%、60%、50%、60%、40%、60%、60%、50%、20%、20%、80%、50%、50%、50%;PCR 法的阳性率分别为:60%、70%、60%、50%、20%、0%、30%、0%、20%、0%、10%、30%、50%、50%。其中,压碎镜检阳性的钉螺共有13只,经RPA检测结果均为阳性,PCR方法仅将其中9只（69%）检出阳性,未能将镜检阳性钉螺全部检出。结论:变温扩增技术和等温扩增技术均对日本血吸虫病有较高诊断价值,其中等温扩增技术诊断准确性相对更高。本研究应用等温扩增RPA技术构建了一种日本血吸虫核酸检测方法,该方法敏感性高、特异性好、简便快速,有望用于血吸虫感染的快速检测及风险监测,具有较好的应用前景。
余新刚[3]（2019）在《miRNA在黄牛和水牛日本血吸虫感染中调节作用的研究》文中认为黄牛和水牛是日本血吸虫（Schistosoma japonicum）的重要天然宿主,也是我国血吸虫病的主要传染源。它们对日本血吸虫感染呈现不同的适宜性,进而导致血吸虫在宿主体内的生长发育、存活以及对宿主的致病作用呈现较大差异。为了探究miRNAs在血吸虫生长发育以及与宿主相互作用过程中的调节作用,本研究采用高通量测序技术（Illumina的Hiseq Xten测序）对来自黄牛（适宜性宿主）和水牛（非适宜性宿主）的日本血吸虫成虫以及感染前（T1）、感染后14 d（T2,早期感染）和感染后42 d（T3,急性感染）黄牛和水牛的血浆、外周血单核细胞（Peripheral blood mononuclear cells,PBMC）的miRNA进行测序,比较黄牛和水牛来源日本血吸虫成虫miRNA表达谱的差别以及黄牛和水牛血浆和PBMC在感染前后miRNA表达谱的变化,并对日本血吸虫真核翻译起始因子（eukaryotic initiation factor 4,eIF4A）的生物学功能进行初探。上述研究可为抗血吸虫疫苗候选分子和新药靶标的筛选提供新的思路。1.黄牛和水牛来源日本血吸虫成虫miRNA表达谱的比较分析。采用高通量测序技术比较了黄牛和水牛来源的日本血吸虫成虫miRNA的表达谱,分别获得了6378万和6321万条miRNA序列。通过生物信息学分析鉴定了206个miRNAs,包括79个已注释的日本血吸虫miRNAs、127个与其他物种miRNAs高度相似的新miRNAs。其中,5个已注释的miRNAs（sja-miR-124-3p、sja-miR-219-5p、sja-miR-2e-3p、sja-miR-7-3p和sja-miR-3490）在水牛组虫体中呈现显着性上调表达,10个新的miRNAs在两组虫体中呈现差异表达。sja-miR-124-3p在黄牛和水牛源虫体中的表达趋势与啮齿类宿主来源虫体一致,可参与调节日本血吸虫真核翻译起始因子eIF4A等的表达。双荧光素酶报告试验证实sja-miR-219-5p可与靶基因Hsc20特异序列结合。5个已注释的差异表达miRNAs可能参与268个靶基因的生物学功能调节,包括虫体的咽肌发育、嘌呤代谢、减数分裂的胞质分裂、减数分裂中纺锤体的定位、细胞骨架依赖性细胞内运输、r RNA加工、m RNA运输、蛋白质运输和繁殖等过程。其中,sja-miR-124-3p和sja-miR-219-5p可能通过调控虫体的神经系统发育、应激反应等进而影响虫体在两宿主体内的生存及发育。2.黄牛和水牛感染日本血吸虫前后血浆miRNA表达谱及差异分析。采用高通量测序技术比较了黄牛和水牛在血吸虫感染不同时期血浆中miRNA的表达谱。测序后共获得352,727,942条有效序列,平均每个样本有14,696,997条。黄牛和水牛组血浆miRNA的基因组比对率分别为90.80%和99.60%。黄牛和水牛血浆在血吸虫感染各期已注释的miRNAs有1,030个,新发现的miRNAs分别为444和438个。与感染前相比,黄牛和水牛血浆在感染早期分别有3个和9个miRNAs呈现特异性差异表达;在急性感染期黄牛和水牛血浆有9个miRNAs呈现共性差异表达,黄牛和水牛血浆分别有39和23个miRNAs呈现特异性差异表达。与感染早期相比,在急性感染期黄牛与水牛血浆有4个miRNAs呈现共性差异表达,分别有35和5个miRNAs呈现特异性差异表达。GO分类和KEGG分析发现这些差异表达miRNAs的靶基因与多个信号通路有关。在感染早期,黄牛和水牛血浆miRNAs在脂肪酸代谢和胰岛素信号通路调节中存在很大差异,可能影响虫体在两宿主体内的生存及发育。3.黄牛和水牛感染日本血吸虫前后外周血单核细胞miRNA表达谱及差异分析。采用高通量测序技术比较了黄牛和水牛PBMC在血吸虫感染不同时期miRNA的表达谱。测序后共获得228,483,170条序列,平均每个样本有9,520,132条有效序列。在血吸虫感染各时期黄牛和水牛PBMC中已注释的miRNAs有1,030个,新发现的miRNAs分别为234和228个。与感染前相比,黄牛与水牛PBMC之间在T3/T1期有45个miRNAs呈现共性差异表达,另有111和69个miRNAs呈现特异性差异表达。与感染早期相比,黄牛和水牛PBMC在T3/T2期有64个呈现共性差异表达,另有147和36个miRNAs呈现特异性差异表达。GO分类和KEGG分析发现这些差异表达miRNAs的靶基因与多个信号通路有关。在急性感染期,黄牛和水牛PBMC的miRNAs在Th1/Th2型细胞因子、Toll样受体信号通路等方面存在差异,可能影响宿主的免疫应答。4.日本血吸虫真核翻译起始因子eIF4A的克隆表达与特性分析。根据Gen Bank中日本血吸虫eIF4A的基因序列（FN315265.1）设计引物,扩增Sj-eIF4A基因;构建其重组表达质粒并转化感受态细胞。采用IPTG诱导表达并纯化该重组蛋白。采用q RT-PCR法检测Sj-eIF4A在不同发育阶段以及不同适宜性宿主来源虫体的转录水平。在体内外对21 d童虫中该基因进行RNA干扰实验,通过扫描电镜观察RNA干扰对虫体繁殖和结构的影响。结果显示,Sj-eIF4A基因全长为1179 bp,编码392个氨基酸,融合蛋白Mr约为46 k Da。Sj-eIF4A在被检的日本血吸虫不同发育阶段均有表达,尤其在毛蚴、14 d童虫以及42 d雌虫体内转录水平较高;在适宜性宿主黄牛和BALB/c小鼠来源虫体内的转录水平高于非适宜性宿主水牛和Wistar大鼠。Sj-eIF4A特异性si RNA不仅能够有效抑制虫体Sj-eIF4A的转录水平并诱导小鼠产生20.63%的减虫率和31.21%的肝脏减卵率,而且能够引起雌虫的排卵异常以及虫体腹吸盘和雌雄虫部分体表结构发生改变。综上所述,本文对黄/牛来源日本血吸虫miRNA的表达差异及黄牛和水牛感染前后PBMC和血浆miRNA表达差异进行了比较分析,并对日本血吸虫真核翻译起始因子Sj-eIF4A进行了克隆表达和基因特性分析。发现了一些对血吸虫生长发育和宿主免疫应答至关重要的虫源性和宿主源性miRNA分子,初步探明了Sj-eIF4A在日本血吸虫生长发育中的重要作用,为揭示不同适宜性宿主与日本血吸虫间的相互作用提供了有价值的信息,也为寻找抗日本血吸虫有效的疫苗候选分子或新药靶标提供了新思路。
石锋[4]（2019）在《日本血吸虫与曼氏血吸虫的杂交及杂交虫株生物学特性的研究》文中研究指明血吸虫病是一种由裂体血吸虫属血吸虫感染引起,严重危害人民健康、阻碍社会经济发展的人畜共患寄生虫病。血吸虫为雌雄异体的复殖吸虫,其种群繁多、分布区域重叠,不同种血吸虫尾蚴感染同一宿主体后,异种童虫在宿主体内雌雄合抱,杂交后可形成新的杂交虫株。优势杂交虫株的产生及其生物学特性如对宿主选择性、生殖力及感染力等改变,势必导致其种群演化、分布区域、流行模式及对人和动物的致病性的变化。随着全球经济一体化及国家间经贸合作迅速发展,国际人员交流频繁,血吸虫的种间杂交机会增加并已成为一种新型的公共卫生问题,因杂交株所致的血吸虫病已成为潜在的全球性疾病,引起了广泛关注。本文研究内容主要包括以下几个方面。第一部分日本血吸虫与曼氏血吸虫杂交虫株的构建目的:探讨日本血吸虫与曼氏血吸虫童虫在同一终宿主能否雌雄合抱产卵进行有性生殖、子代虫卵孵化出毛蚴感染宿主螺、幼虫在螺体内完成无性生殖,从而形成具有生殖力的杂交虫株。方法:采用单只毛蚴感染单只中间宿主螺（钉螺、光滑双脐螺）的方法,制备单性别尾蚴,分别采用雌性曼氏血吸虫尾蚴与雄性日本血吸虫尾蚴、雌性日本血吸虫尾蚴与雄性曼氏血吸虫尾蚴感染同只小鼠,收集感染鼠粪便中虫卵,孵化毛蚴分别感染钉螺和光滑双脐螺,螺按常规方法饲养25℃的实验室环境中,感染性螺逸出尾蚴再感染小鼠收集卵孵化完成生活史过程。结果:雌性曼氏血吸虫与雄性日本血吸虫杂交感染组小鼠感染后52天在粪便中出现类似曼氏血吸虫虫卵的杂交虫卵。杂交虫卵孵化出的毛蚴成功感染钉螺、光滑双脐螺,杂交株尾蚴从钉螺、光滑双脐螺中逸出的时间分别在感染后第70天、42天,从杂交株尾蚴感染宿主到产卵需要42天;雌性日本血吸虫与雄性曼氏血吸虫杂交感染组小鼠感染后46天在粪便中出现类似于日本血吸虫虫卵的杂交虫卵。杂交虫卵孵化出的毛蚴感染钉螺,杂交株尾蚴在感染后第93天从钉螺逸出,从杂交株尾蚴感染宿主到产卵需要36天。结论:日本血吸虫与曼氏血吸虫在小鼠体内合抱杂交的两个杂交虫株均可完成生活史各阶段的发育并可产生可育的子代;雌性曼氏血吸虫尾蚴与雄性日本血吸虫尾蚴、雌性日本血吸虫尾蚴与雄性曼氏血吸虫尾蚴混合感染杂交后虫卵形态学特征和毛蚴对中间宿主螺的选择性均有改变。第二部分日本血吸虫与曼氏血吸虫杂交虫株的生物学特性目的:比较雌性曼氏血吸虫尾蚴与雄性日本血吸虫尾蚴、雌性日本血吸虫尾蚴与雄性曼氏血吸虫尾蚴混合感染后所形成的两个杂交虫株生物学特性的变化,以探索杂交虫株的生物学性状的变化对血吸虫病传播的影响。方法:日本血吸虫雌雄尾蚴、曼氏血吸虫雌雄尾蚴、雌性曼氏血吸虫尾蚴与雄性日本血吸虫尾蚴、雌性日本血吸虫尾蚴与雄性曼氏血吸虫尾蚴混合定量感染小鼠,于感染20天后开始逐日收集每只小鼠排出的粪便,采用生理盐水直接涂片法检查粪便中的虫卵;待感染鼠粪便出现虫卵后,解剖小鼠收集寄生于每只小鼠肠系膜静脉、肝门静脉和肝内的血吸虫虫体,解剖镜下计数雌虫、雄虫及雌雄合抱的成虫数,计算各组血吸虫成虫的雌雄合抱率,对雌雄合抱及未合抱的成虫长度进行测量。取肝脏组织,用尼龙绢袋集卵法收集虫卵,固定后测量虫卵的大小;取新鲜虫卵进行孵化,计算虫卵的孵化率;用定量毛蚴感染钉螺和光滑双脐螺计算毛蚴对螺的感染率,观察尾蚴在螺内逸出的开放前期。结果:在终宿主小鼠体内,日本血吸虫、曼氏血吸虫粪便虫卵的开放前期分别为36.09?1.98天、44.74?1.98天,雌性曼氏血吸虫与雄性日本血吸虫感染组、雌性日本血吸虫与雄性曼氏血吸虫感染组粪便虫卵开放前期分别为54.30?2.23、48.74?2.09天。雌性曼氏血吸虫与雄性日本血吸虫感染组粪便虫卵开放前期与曼氏血吸虫组间差异有统计学意义（t=16.87 P（27）0.001）);雌性日本血吸虫与雄性曼氏血吸虫感染组粪便虫卵的开放前期与日本血吸虫组间差异有统计学意义（t=21.08 P（27）0.001）);雌性曼氏血吸虫与雄性日本血吸虫感染组、曼氏血吸虫卵的长度与宽度分别为122.79?8.92、59.77?5.14?m和115.21?8.75、56.24?5.49?m,虫卵的孵化率分别为2.40%,5.50%,杂交株虫卵大小显着大于曼氏血吸虫虫卵（P（27）0.01）、孵化率低于曼氏血吸虫（P（27）0.05）;雌性日本血吸虫与雄性曼氏血吸虫感染组、日本血吸虫虫卵的长度与宽度分别为76.64?3.97、57.56?2.97?m和72.90?3.50、52.99?1.88?m,虫卵的孵化率分别为4.85%,5.55%,杂交株虫卵大小明显大于日本血吸虫虫卵（P（27）0.01）、孵化率低于日本血吸虫（P（27）0.05）。日本血吸虫、曼氏血吸虫、雌性日本血吸虫与雄性曼氏血吸虫、雌性曼氏血吸虫与雄性日本血吸虫感染组成虫的雌雄合抱率分别为84%、74.64%、60.85%、40.00%（P（27）0.05）;日本血吸虫合抱后雌虫长度为18.87?1.66mm,未合抱雌虫成虫长度11.13?1.69mm,曼氏血吸虫合抱后雌虫长度为13.36?0.92mm,未合抱雌虫成虫长度8.26?0.94mm,同种血吸虫间合抱雌虫长于未合抱雌虫长度,差异有统计学意义（P（27）0.01）;雌性日本血吸虫与雄性曼氏血吸虫混合感染4组雌雄合抱后雌虫、雄虫长度为分别为6.50?0.77、7.07?0.63mm,未合抱雌虫、雄虫6.75?0.79、7.07?0.75mm;雌性曼氏血吸虫与雄性日本血吸虫混合感染2组雌雄合抱后雌虫、雄虫长度为分别为5.40?0.91、8.17?0.89mm,未合抱雌虫、雄虫长度分别为5.36?0.80、8.07?0.75mm,异种血吸虫合抱后雌虫、雄虫长度明显短于同种血吸虫合抱（P（27）0.05）,合抱与未合抱虫体长度差异无统计学意义（P（29）0.05）。雌性曼氏血吸虫与雄性日本血吸虫杂交株毛蚴既可以感染钉螺,也可以感染光滑双脐螺,感染率分别为4.61%、5.11%;雌性日本血吸虫与雄性曼氏血吸虫杂交株毛蚴只可以感染钉螺,感染率为1.44%;日本血吸虫毛蚴感染钉螺及曼氏血吸虫毛蚴感染光滑双脐螺的感染率分别为8.94%和11.33%,杂交株毛蚴的感染率低于日本血吸虫、曼氏血吸虫的感染率,差异有统计学意义（?2=131.25,P（27）0.01）。雌性曼氏血吸虫与雄性日本血吸虫杂交株毛蚴感染光滑双脐螺及钉螺的杂交株尾蚴开放前期、曼氏血吸虫的尾蚴开放前期分别为43.38?1.19、70.14?1.79、37.36?2.16天,杂交株尾蚴开放前期与曼氏血吸虫间差异有统计学意义（P（27）0.01）;雌性日本血吸虫与雄性曼氏血吸虫杂交株毛蚴感染钉螺的杂交株尾蚴的开放前期、日本血吸虫尾蚴开放前期分别为96.54?3.15、64.45?2.84天,杂交株尾蚴开放前期与日本血吸虫间差异有统计学意义（P（27）0.01）。结论:异种血吸虫成虫的雌雄合抱率低于同种血吸虫,同种血吸虫的雌雄合抱可促进雌虫发育,但对雄虫发育无影响,异种血吸虫合抱与未合抱对虫体的发育无显着差异,且雌虫、雄虫成虫的长度均明显短于同种血吸虫合抱的虫体。雌性日本血吸虫与雄性曼氏血吸虫感染组虫卵的形态与日本血吸虫虫卵相近、虫卵的孵化率降低、虫卵在粪便中开放前期长于日本血吸虫,杂交株毛蚴可以感染钉螺,杂交株毛蚴的感染率降低;雌性曼氏血吸虫与雄性日本血吸虫感染组虫卵的形态与曼氏血吸虫虫卵相近、虫卵的孵化率降低、虫卵在粪便中开放前期长于曼氏血吸虫,杂交株毛蚴既可以感染钉螺,也可以感染光滑双脐螺,杂交株毛蚴的感染率降低、杂交株尾蚴在钉螺和光滑双脐螺体内的开放前期延迟。第三部分日本血吸虫与曼氏血吸虫杂交虫株的分子标记目的:探讨合抱虫体及杂交虫株与父本母本间关系的分子学基础。方法:利用文献检索法和实验室筛选获得的血吸虫STR,针对日本血吸虫和曼氏血吸虫建立STR扩增体系,采用曼氏与日本血吸虫多重PCR反应体系,对混合感染雌雄合抱虫体及杂交株子代进行虫种鉴别;采用基因组重测序技术对杂交株子代与亲本的同源性进行分析。结果:雌性日本血吸虫与雄性曼氏血吸虫混合感染组雌雄合抱虫体中的雌虫DNA均可在日本血吸虫多重PCR反应体系被扩增,雄虫DNA均可在曼氏血吸虫多重PCR反应体系被扩增;雌性曼氏血吸虫与雄性日本血吸虫混合感染组雌雄合抱虫体中的雌虫DNA均可在曼氏血吸虫多重PCR反应体系被扩增,雄虫DNA均可在日本血吸虫多重PCR反应体系被扩增。雌性曼氏血吸虫与雄性日本血吸虫杂交株毛蚴、尾蚴及发育成的成虫均可在曼氏血吸虫多重PCR反应体系扩增,但在日本血吸虫多重PCR反应体系无扩增;雌性日本血吸虫与雄性曼氏血吸虫杂交株毛蚴、尾蚴及发育成的成虫均可在日本血吸虫多重PCR反应体系扩增,但在曼氏血吸虫多重PCR反应体系无扩增。同源性分析:雌性曼氏血吸虫与雄性日本血吸虫杂交株成虫（源于钉螺）基因组有至少1个、4个碱基覆盖的位点占日本、曼氏血吸虫基因组的百分比分别为94.49%、91.91%和2.44%、1.51%;雌性曼氏血吸虫与雄性日本血吸虫杂交株成虫（源于光滑双脐螺）基因组有至少1个、4个碱基覆盖的位点占日本、曼氏血吸虫基因组的百分比分别为2.36%、1.58%和97.20%、94.53%;雌性日本血吸虫与雄性曼氏血吸虫杂交株成虫基因组有至少1个、4个碱基覆盖的位点占日本、曼氏血吸虫基因组的百分比分别为95.45%、91.62%和2.33%、1.47%。结论:雌性曼氏血吸虫与雄性日本血吸虫、雌性日本血吸虫与雄性曼氏血吸虫混合感染组雌雄合抱虫体均分别为日本血吸虫和曼氏血吸虫。杂交株子代毛蚴、尾蚴及成虫DNA只能经其母本多重PCR反应体系被扩增。雌性曼氏血吸虫与雄性日本血吸虫杂交后源于钉螺的杂交株虫体与日本血吸虫同源性高,源于双脐螺的杂交株虫体与曼氏血吸虫同源性高;雌性日本血吸虫与雄性曼氏血吸虫杂交株虫体与母日本血吸虫同源性高。提示,日本血吸虫与曼氏血吸虫间的杂交生殖缺乏有基因交流的证据,似与孤雌生殖有关。
许蓉[5]（2018）在《日本血吸虫SjELAV-like 1基因的克隆、表达及功能的初步研究》文中认为血吸虫病是由血吸虫感染引起的一种对社会、经济发展危害严重的人畜共患寄生虫病。雌虫产生的虫卵是血吸虫病导致病理损伤的主要因素,同时也是该疾病传播的根本原因。因此,研究血吸虫生殖发育相关的基因功能,从控制血吸虫生殖发育来控制血吸虫病的发生具有重要意义。本研究克隆和表达了日本血吸虫胚胎致死异常视觉基因1（SjELAV-like 1）,并分析了该基因在日本血吸虫体内的表达情况及定位,探究该基因对日本血吸虫形态和生殖发育的影响。利用PCR技术获得SjELAV-like 1基因序列（Gene Bank登录号:MG515727）,获得的SjELAV-like 1基因序列长1797bp,其中编码序列为1533 bp,编码510个氨基酸。通过构建该序列的重组表达质粒pET28-SjELAV-like 1,并在大肠杆菌BL21中利用IPTG诱导表达,收集诱导0h,1h,2h,3h,4h,6h,8h的菌体,SDS-PAGE法进行蛋白电泳发现,重组蛋白主要存在于包涵体中,且在诱导4h时表达量最高。利用His镍柱亲和层析法纯化大量表达所得重组蛋白,用纯化重组蛋白免疫小鼠制备多克隆抗体,Western blotting分析发现该重组蛋白具有良好的免疫原性。间接免疫荧光试验表明SjELAV-like 1蛋白主要分布在日本血吸虫体体被。小鼠腹部贴片法感染日本血虫尾蚴,收集虫体不同时期和不同时期合抱分开的雌、雄虫体,以单钉螺逸出的尾蚴和混合钉螺逸出的尾蚴分别感染小鼠获得25 d单性雌、雄虫体和合抱分开的雌、雄虫体,Trizol法提取总RNA,实时定量PCR分析SjELAV-like 1基因的表达情况发现,该基因在不同发育阶段和不同发育阶段雌、雄虫体内均有表达,在雄虫体内表达稳定,但在雌虫体内随着发育成熟其表达水平呈下降趋势;在不同感染状态的雌、雄虫体内,与正常发育雌虫相比,该基因在发育阻遏雌虫体内高表达,而在雄虫体内无明显差异。小鼠尾静脉注射法进行最佳小干扰RNA（siRNA）的筛选,用于长期RNA干扰（RNAi）试验,与NC组相比,所筛选的小干扰RNA S2具有良好的干扰效果,长期干扰组小鼠肝减卵率、雌虫对肝卵贡献减少率和卵胚减孵化率分别为58.27%（P<0.05）、40.59%（P<0.01）和74.58%（P<0.01）;电镜观察发现,与对照组相比,干扰组虫体体被结构改变,雄虫体表粘附的泡状物消失,立体的褶脊结构塌陷,整齐排列的条索状皮脊变的疏松,网状结构消失,雌虫体壁表面组织间隙增宽,分布于其上的体棘减少、变钝,雄虫精母细胞数目减少,其内的染色质减少,细胞肿大,细胞间质增宽,雌虫卵黄细胞中卵黄球减少,其中包含的卵黄滴也减少,内质网肿大,皮质颗粒排列散乱。本研究成功克隆和表达了在日本血吸虫发育阻遏雌虫中高表达的部分SjELAV-like 1基因序列,且发现该基因主要在虫体体被表达。该基因沉默使肝脏荷卵数、雌虫对肝卵贡献率和卵胚孵化率均显着性降低,并改变虫体体被结构,抑制生殖器官的正常发育,提示该基因对日本血吸虫的生殖发育有重要的作用。
黄帅钦[6]（2018）在《日本血吸虫在钉螺体内被生物控制的分子机制初步探究以及MIF细胞因子在湖北钉螺对日本血吸虫免疫反应过程中的功能分析》文中研究指明血吸虫病是一种严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病,全世界范围内有超过2.5亿人感染血吸虫,还有78个国家和地区的将近7.79亿人面临着被感染的危险;据不完全统计每年有超过20万人死于血吸虫病,并造成了巨大的经济损失。湖北钉螺（Oncomelaniahupensis）是日本血吸虫（Schistosomajaponicum）唯一的中间宿主,其在血吸虫病的传播和流行过程当中发挥着不可替代的作用。除此之外,湖北钉螺还可作为一种鱼类吸虫-外睾吸虫（Exorchissp.）的中间宿主,研究发现应用无害的外睾吸虫能够成功地在其媒介钉螺体内对血吸虫幼虫进行生物控制,即钉螺在先感染外睾吸虫之后可以拮抗再入侵的血吸虫幼虫,后进入钉螺体内的血吸虫幼虫发育全部不正常、受阻,并最终全部被杀死。本文首先对血吸虫病疫区江西省星子县鄱阳湖流域进行生物控制资源的初步调查,结果显示在2012-2016年间共解剖野生鲶鱼494条,其中感染外睾吸虫的鲶鱼共有325条,总的感染率约为65.79%,总的平均感染强度为14.21条;在2012-2015年间共检查了 19528粒钉螺,其中外睾吸虫阳性钉螺总数为216粒,感染率约为1.11%,血吸虫阳性钉螺为12粒,感染率约为0.06%。从调查结果可以看出鄱阳湖区鲶鱼外睾吸虫感染率很高,湖北钉螺外睾吸虫的感染率也要远远高于血吸虫的感染率,表明外睾吸虫的资源较为丰富,不仅能为后续的研究提供便利,更为重要的是能够为未来生物控制方法的普及和实施提供支持。鉴于目前在湖北钉螺内在分子和细胞机制等方面研究的文献资料极为匮乏,厦门大学生命科学学院的唐崇惕教授和郭跃博士、上海兽医研究所的林矫矫教授、上海交通大学生命科学学院的乔中东教授以及国家人类基因组南方研究中心的王升跃教授共同合作对四种不同感染情况的湖北钉螺转录组进行测序以及差异表达谱进行分析,我们从中筛选出了一些可能在生物控制过程中有着重要作用的蛋白质分子,例如MIF（Macrophage migration inhibitory factor,巨噬细胞迁移抑制因子）和TRX（Thioredoxin,硫氧还蛋白）等;通过数据分析、文献查阅和实验验证,并结合生物控制过程中所观察到的表型,我们确定了本文中所重点研究的目标分子湖北钉螺MIF,即OhMIF。MIF是一种具有多重功能的细胞因子,在宿主抵抗外来微生物和病原入侵以及免疫细胞促炎症反应中均发挥着重要的免疫调节功能。在本文中,我们根据钉螺转录组中得到的湖北钉螺MIF（OhMIF）全长cDNA序列,成功地从钉螺体内对OhMIF进行了克隆,接下来我们利用点突变以及原核表达系统成功地对重组OhMIF蛋白（rOhMIF）和其突变体OhMIFP2G重组蛋白（rOhMIFP2G）分别进行了表达和纯化,并对其互变异构酶活性进行了测定,结果显示rOhMIF呈现出依赖于第二位脯氨酸（Pro2）的D-多巴胺互变异构酶活性,并且该酶活性能够被哺乳动物MIF特异性抑制剂ISO-1所抑制,表明该结合位点是保守的;除此之外,我们又分别对rOhMIF和rHsMIF（人类MIF重组蛋白）的D-多巴胺互变异构酶活性的动力学常数进行测定和比较分析,结果显示出rOhMIF对底物的亲和力以及催化效率要均低于rHsMIF;接下来,我们通过实验证实rOhMIF还呈现出利用DTT作为还原剂来还原胰岛素的氧化还原酶活性,而哺乳动物MIF则是利用GSH作为还原剂;而且,我们还通过体外注射实验证实rOhMIF和其突变体rOhMIFP2G均能够促进ERK1/2的磷酸化和活化,表明rOhMIF的互变异构酶活性对于该功能的发挥并不是必需的。接下来,我们通过实验证实OhMIF在钉螺各个组织中均有表达,在钉螺血淋巴细胞中定位在细胞质;同时我们还发现当钉螺感染血吸虫之后,OhMIF的表达量有着明显的上调,表明其在钉螺对于血吸虫入侵进行免疫防御过程中可能发挥着重要的作用。为了能够更好地探究OhMIF在钉螺免疫系统中的功能,我们首先根据细胞体积和细胞颗粒密度对钉螺血淋巴细胞进行了较为系统的分类,并采用体外喂食法对OhMIF在钉螺体内的表达量进行敲低;实验结果显示OhMIF敲低之后能够显着地降低吞噬性血淋巴细胞在总的循环性血淋巴细胞中的比例,同时较大体积以及较高颗粒密度血淋巴细胞的比例也呈现出明显的降低趋势,表明OhMIF在血淋巴细胞的成熟和分化过程中具有重要的功能。除此之外,我们还通过实验证实OhMIF能够有效地促进吞噬性血淋巴细胞向着血吸虫感染部位进行迁移。由于我们从上述四种不同钉螺样品的转录组测序和差异表达分析中只是拿到了很少一部分数据,为了以后能够更好、更加深入地进行后续的研究,接下来我们又采用转录组与蛋白质组相结合的方式来探究生物控制作用的内在分子机制。结果显示共得到了 46162条独立的湖北钉螺unigene,利用iTRAQ技术共鉴定到了 3811个蛋白,分别对得到的基因和蛋白进行功能分类和注释分析,并以此作为数据库,对四种不同感染情况钉螺中差异表达的蛋白进行鉴定,然后针对其中我们比较感兴趣的两组差异蛋白进行更进一步的分析,即Common组（146个）和Only组（195个）,经过功能分类与注释分析,找到了一些可能在钉螺免疫防御系统中起着关键作用的蛋白。综上所述,本文基于利用外睾吸虫在钉螺体内对血吸虫进行生物控制的表型、四种不同感染情况钉螺转录组测序和差异表达分析以及MIF的研究进展和功能综述,进而确定了本文所要研究的目标分子-OhMIF。接着我们又对OhMIF进行了鉴定及其生物学活性的测定和分析,发现OhMIF在不同吸虫感染情况钉螺体内以及不同时间血吸虫感染钉螺体内的表达量均呈现出显着的差异;接下来我们又通过实验证实OhMIF在钉螺对于血吸虫先天性免疫反应过程中发挥着重要的作用;同时为了以后更广泛、全面地探究该生物控制过程的内在机制,我们还通过转录组与蛋白质组相结合的方式鉴定出了一些可能在此过程中具有重要作用的差异表达分子。本文是首次对湖北钉螺免疫相关分子进行功能性的探究,相信本文中所采用的方法和手段或许可为以后钉螺中其它关键分子的研究提供模板,本文中的内容也将会有助于更进一步地探究和理解宿主与寄生虫的相互关系。但是由于这些方面研究的信息和材料尚且不足,很多的实验研究仍处于早期的探讨摸索阶段,难免会存在许多不足和短缺之处,我们今后会更加仔细、全面地对钉螺的免疫防御系统展开深入的研究,进一步地了解钉螺与寄生虫之间的相互作用关系,为血吸虫在钉螺体内的生物控制提供更加详细的科学依据。
李雪[7]（2017）在《氯硝柳胺微乳剂的研制及对血吸虫感染的防护效果评价》文中指出我国血吸虫病防治历程划分为三个阶段:第一阶段（1950-1978）以消灭钉螺为主的综合防治策略。第二阶段（1979-2003）以人畜同步化疗为主的综合防治策略。第三阶段（2004年至今）“以传染源控制为主”的血吸虫病综合防治策略,主要采用封洲禁牧、以机代牛等防治措施。虽然取得了较好的防治效果,但疫区的畜牧经济受到了一定的影响。因此,研制可用于人、畜预防血吸虫感染的防护剂将是控制传染源,切断血吸虫病传播的重要措施之一。氯硝柳胺是WHO唯一推荐使用的杀螺药,在我国血吸虫病疫区得到了广泛的应用,其除了有较好的杀螺作用外,还具有良好的杀尾蚴作用,可作为防护剂的主药研制防护剂。微乳具有良好的局部皮肤给药特性,可增大药物的溶解度,降低表面张力,提高生物利用度。氯硝柳胺溶解度较低,微乳可极大地增加难溶性药物的溶解度,显着增加药物的局部和系统传递,从而增加给药量。将氯硝柳胺制成微乳剂,达到用药方便和保证皮肤中长时间、高浓度滞留,氯硝柳胺微乳防护剂可用于人与动物的皮肤表层防止血吸虫尾蚴进入皮肤而减少感染血吸虫病,从而起到防治作用。因此研究氯硝柳胺微乳剂有很大的理论与实际意义。本研究内容主要包括如下三部分:第一部分:氯硝柳胺微乳的制备在预实验的基础上,筛选构成微乳所需的表面活性剂,助表面活性剂,油相,通过滴定法绘制拟三元相图,研究各组分及其比例对微乳形成的影响,筛选合适的微乳配方,确定最佳制备工艺。获得最佳微乳配方为,配方一:氯硝柳胺原料药（0.5%）、聚氧乙烯氢化蓖麻油（17.5%）、丙二醇二辛酸酯（22.5%）、PEG400（33.2%）和蒸馏水（26.3%）;配方二:氯硝柳胺原料药（0.4%）、聚氧乙烯35蓖麻油（33.0%）、中链甘油三酸酯（16.5%）、PEG400（6.1%）和蒸馏水（44.0%）。第二部分:氯硝柳胺微乳的理化性质及稳定性的评价对氯硝柳胺微乳的形态、pH值、黏度、粒径、Zeta电位、含药量及包封率进行了观察和测定;并进行氯硝柳胺微乳离心、温度、光照等稳定性影响因素实验和储存稳定性实验。结果表明:氯硝柳胺微乳呈类球形;配方一和配方二的平均pH值分别为5.833和5.714;配方一、二的平均黏度分别为1666.7 mpa·s和808.3 mpa·s;配方一平均粒径为85.11 nm,配方二平均粒径为23.08 nm;配方一、二Zeta电位均为0mV左右;配方一、配方二中的平均含药量分别为5.56 mg·ml-1和4.34 mg·ml-1;配方一的总包封率达87.02,配方二的总包封率达84.06。稳定性影响因素实验结果显示:配方一、配方二在避光,4℃下贮存稳定;其外观、pH值及含量等各项考察指标基本无变化。第三部分:氯硝柳胺微乳防护效果评价对2个配方进行杀尾蚴实验、透皮实验及小鼠预防感染实验。配方一氯硝柳胺浓度大于5×10-4C时,5min内100%杀死尾蚴;配方二浓度大于10-4C时,5min内100%杀死尾蚴;2个配方均有较好的杀尾蚴作用。而配方中氯硝柳胺不易透过小鼠皮肤,可以储存在皮肤层中,降低了对受试小鼠的毒副作用,减少了小鼠体内的代谢,延长了药物在皮肤的保留时间,表明其可在小鼠皮肤有效滞留并杀死接触皮肤的血吸虫尾蚴。微乳小鼠皮肤给药1d后尾蚴经皮肤感染小鼠,配方一、二中的小鼠感染率均为0%;给药3d感染的小鼠,感染率均为20%,减虫率均为99.41%;给药7d感染的小鼠,配方一、二的感染率分别为60%和30%,减虫率均为93.68%。配方一、二均有较好的预防血吸虫感染作用。
高雨蒙[8]（2017）在《我国某山区血吸虫病流行区2012～2015年日本血吸虫的群体遗传学分析》文中指出目的:日本血吸虫病是一种由日本血吸虫感染且严重危害人类健康的寄生虫病,我国是流行最严重的国家之一,部分地区出现死灰复燃或疫情回升。由于地理隔离、终宿主差异等因素影响,日本血吸虫种群出现地域或终宿主等差异,同时瓶颈效应、奠基者效应、基因交流等也会使得日本血吸虫种群遗传结构在时间上发生变化。基因分型错误可以导致种群基因（型）频率发生偏差,只要有一个位点基因分型出现错误,就可能致使该个体在多个位点的基因型上产生至少一个错误。因此,本研究首先利用日本血吸虫家系标本,分析日本血吸虫7个常见微卫星位点基因分型错误率,然后在此基础上应用这7个微卫星位点对我国某山区血吸虫病流行区（村）20122015年日本血吸虫群体进行遗传分析,以了解该地区血吸虫群体遗传结构在时间上的变化,进而分析流行趋势或评价血防措施效果,为指导防治提供依据。方法:通过实验室杂交建立和收集血吸虫家系标本即亲代（成虫）和子代（毛蚴,收集和保存在Whatman FTA卡上）,然后运用日本血吸虫常用7个微卫星位点对标本进行多重PCR扩增,Cervus软件检测基因分型错误。利用这7个微卫星位点对我国某山区血吸虫病流行区20122015年日本血吸虫种群进行群体遗传学研究,应用GenAlEx软件计算种群遗传多样性指标、种群间遗传分化指数,同时进行分子生物学方差分析和哈迪-温伯格平衡;应用Structure软件构建群体结构;使用BOTTLENECK软件检测群体是否经历过瓶颈效应。结果:1.日本血吸虫7个常见微卫星位点平均基因分型错误率为4.3%,其中sjp22错误率最高（9.8%）,位点sjp4和sjp18没有发现错配,错误类型主要为等位基因丢失。2.在已知母-子或父-子亲缘关系下,分别检测有16个和15个基因分型错误。位点sjp4和sjp18没有发现错配,而位点sjp22错误率最高,在母-子和父-子中分别为11.4%和17.1%,其次为TS2。3.本研究试区20122015年血吸虫种群内平均等位基因数为7.28612.000,其中2015年群体最低;除了2015年血吸虫群体在位点sjp22未偏离哈温平衡外,该种群在其他位点以及其他种群在所有位点均偏离哈温平衡。4.群体间Fst值的范围为0.009（2013年VS 2014年）0.093（2012年VS 2015年）;Nei遗传距离为0.028（2014年VS 2015年）0.079（2012年VS 2014年）。Structure结果显示合理亚群数目为4。分子生物学方差分析（AMOVA）,种群间、个体间以及个体内的变异分别占总变异2%、43%和55%,经过统计学检验,p值都小于0.05。5.利用BOTTLENECK软件进行Wilcoxon符号-秩和检验,在IAM模式下,该地区2015年血吸虫种群呈现出显着性变化（P<0.05）;而在TPM模式下,该地区血吸虫种群均未显示出显着性变化（P>0.05）。绘制等位基因频率分布图,该地区除了2015年血吸虫种群未显示明显“L”型,其它种群均显示典型的“L”型。结论:1.使用的7个微卫星位点中,位点sjp4和sjp18是高度适合的;2.这7个微卫星位点存在一定基因分型错误,但对该地区不同年度间血吸虫种群分析时使用相同的多重反应体系,因此并不会影响总体结论;3.随着时间推移,本研究试区血吸虫种群数量有所降低,但是目前不足以使得种群遗传多样性发生有统计学意义的改变;种群显示杂合度缺失,可能与样本存在时间上基因交流、宿主选择压力作用、瓶颈效应以及华伦效应有关;4.四年间血吸虫种群的遗传差异具有统计学意义,可能与当地长期密集的血防措施或者与其他地区血吸虫种群存在一定的基因交流有关;5.最近1年血吸虫种群可能存在瓶颈效应,应再收集该地区以后年份血吸虫样本进行分析,以更加科学评价当地血防措施,为以后防治提供有效指导。
杨佩才,张洪英,谢朝勇,殷位刚,周玮[9]（2016）在《日本血吸虫单性感染虫体与复性感染虫体的比较》文中研究说明目的对单性感染或复性感染钉螺的日本血吸虫发育结果进行观察。方法采用单个毛蚴感染单个钉螺,26℃恒温箱中饲养,60 d后逸蚴感染小白鼠（单性感染）,40 d后解剖小白鼠,以检获的成虫性别鉴别各个钉螺中的尾蚴性别。再分别以单性尾蚴和混合双性尾蚴感染鼠、兔,40 d后解剖观察宿主感染情况及虫体。结果单性感染小鼠和兔后解剖获得日本血吸虫雄虫或雌虫。复性感染小鼠或兔后检出的虫体主要有3种形态:雌雄合抱、雄虫和雌虫,极少数能看到雄虫合抱未发育成熟雌虫的现象。单性感染的鼠、兔肝脏均未见虫卵,而复性感染的鼠、兔肝脏均查见虫卵。单性感染的雄虫能发育成熟,但体型较合抱成熟的雄虫略小,仅凭肉眼难以与合抱成熟雄虫区分;而单性感染的雌虫则不能发育成熟,镜下卵巢不易见到或仅见到雏形,体型明显细小。结论单性感染的雄虫和雌虫体型比复性感染合抱成熟的雄虫和雌虫的体型小,单性感染的雄虫能发育成熟,而雌虫则不能发育成熟。在解剖哨鼠时,即使未查见肝脏虫卵,仍需检查肠粘膜血管中是否有单性感染的血吸虫。
黄玉政[10]（2016）在《南京地区日本血吸虫病的流行病学调查及其基于血清差异多肽检测方法的建立与应用》文中提出血吸虫病是对人与动物危害最严重的寄生虫病之一,是世界卫生组织认定的分布范围最广、经水传播疾病（Water-borne diseases）感染率最高的寄生虫病。至2015年底,江苏省除南京市四个区县（栖霞、六合、浦口、江宁）与镇江市3个区县（丹徒、扬中、润州）尚处于血吸虫病控制阶段,其余各市（县、区）均已达血吸虫病传播阻断标准。然而,长江中上游部分省市仍然处于疫情控制阶段,其阳性钉螺与感染病人病畜仍时有发现,部分达标地区存在钉螺复燃情况,且钉螺（Oncomelania hupensis）可随水系扩散与人群流动频繁等因素,对江苏血防构成较大的威胁。因此,对当前低流行态势下的重点区域血吸虫病流行情况做一全面调查,对血防策略的调整具有重要意义。血防监测包括对血吸虫中间宿主（钉螺）分布、终宿主（人与易感动物）的流行病学调查、应用“哨鼠”开展早期预警、晚期血吸虫病人的诊断与治疗。在当前低流行态势下,以抗体ELISA检测、粪便查虫卵为主的方法,已满足不了早期监测的要求,亟需发展快速、准确的检测新方法：寄生虫学剖检查成虫的哨鼠检测方法也存在时效性差、耗时耗力、准确性不高等缺点,迫切需要发展更为准确、快速、灵敏的方法；再者,针对新发展晚血病人与现症病人的鉴别,在血吸虫病低流行态势下,需建立新的辅助诊断方法。本研究在南京地区开展了血吸虫病流行病学调查,并基于血清差异多肽建立诊断新方法以及应用于实验小鼠、预警“哨鼠”及晚血与现症病人的鉴别诊断。1.钉螺及其感染尾蚴与人畜感染日本血吸虫抽样调查2013-2014年在栖霞区、2015年在高淳区的芜申运河水阳江段开展了钉螺密度与人畜感染情况调查。方法：根据《血吸虫病控制与消除标准GB15976-2015》,机环结合法开展钉螺调查,DDIA血清学与尼龙绢袋集卵孵化粪检法开展人群调查,塑料杯顶管粪便孵化法检测动物血吸虫感染；并结合往年报表数据分析。结果：栖霞区与高淳区的水阳江段均未查到阳性钉螺：但水阳江段活螺密度显着高于其他地区,提示水阳江段具备血吸虫病传播风险。人群调查显示,栖霞区2个行政村的血清学检查阳性率均低于1%,高淳区3个行政村血检阳性率2.48%,粪检均未查出阳性。家畜粪检未检测到感染。结论：综合2004-2014江苏省血吸虫病防治工作报表分析,江苏省内有螺面积逐年减少,活螺数与活螺密度维持在相对稳定的较低水平；血吸虫病呈低度流行态势,近年无血吸虫急性感染病例报道；高淳区水阳江段血检阳性率高于1%的血吸虫病传播控制标准,也高于全省其他地区的血清阳性率,提示该地区具有较高风险,需加强疫情监测。2.实验兔血清肽谱分析及基于血血清差异多肽检测法的建立分析血吸虫急性感染实验兔的血清肽质量指纹图谱,并根据血清差异多肽建立诊断方法。方法：通过血清采集、磁珠富集血清多肽、MALDI-TOF/TOF质谱检测与ClinProTools分析血清肽质量指纹图谱,建立人工感染兔的血清差异多肽诊断方法（CPT方法）,并进行敏感性与特异性分析,比较多种方法检测不同感染时期的准确性。结果：Mr 1787蛋白分子在兔感染后第6d有显着上调（P<0.05）；在感染后第9 d,Mr 2834蛋白分子有极显着上调（P<0.01）,Mr 3483呈显着上调（P<0.05）,Mr 4018有显着下调（P<0.05）。在感染后第12 d,Mr 3151蛋白分子有显着下调（P<0.05）,而Mr 4018则出现极显着下调（P<0.01）,Mr 3530呈显着上调（P<0.05）,两者趋势一直持续至感染后第30 d。经二级质谱鉴定并搜库比对,预测Mr 1787蛋白为α烯醇化酶的片段,Mr 3530预测为热休克蛋白90或热休克蛋白47片段,提示此两种蛋白可能为血吸虫感染兔的早期疾病标志物。基于感染第5周与健康对照组血清差异多肽指纹图谱,利用ClinProTools软件建立感染组与健康对照组的区别诊断模型,盲测样本显示,感染1、2、3、4 w的家兔血清鉴定为阳性的占30%、55%、75%、80%,而同期ELISA检测结果分别为0,0,20%和50%,利用弓形虫感染血清验证,结果显示特异性好。结论：基于血清差异表达多肽建立的诊断方法,敏感性要优于常规的ELISA法,有望应用于血吸虫病早期检测并筛选具有诊断价值的血清多肽（蛋白）标志物。3.血血清多肽检测方法的应用3.1血清差异多肽检测法在实验小鼠模型上的应用小鼠动物模型在血吸虫感染实验及相关研究中应用广泛,发展对其快速、准确、简便的诊断方法意义重大。方法：采用血清富集并磁珠纯化多肽、MALDI-TOF/TOF质谱检测与ClinProTools分析肽质量指纹图谱,根据急性感染第5 w与健康对照组血清差异表达多肽,建立检测方法（CPT方法）,并比较ELISA、寄生虫学剖检等多种方法的检测敏感性,并验证急性感染不同时期、不同感染度小鼠的准确性。结果：与传统的ELISA方法比较,CPT方法在第1w即检测到急性感染小鼠5%（3/60）的阳性率,在第2w至第5w呈逐渐上升趋势,分别为35%（21/60）,75%（45/60）,87.93%（51/58）与98.15%（53/54）,而ELISA方法在感染后第3w才检测到阳性,其3-5 w的感染率分别为65%（39/60）,77.59%（45/58）与94.44%（51/54）,均低于CPT方法；寄生虫学剖检在第3、4 w有70%（7/10）的小鼠被检出阳性,低于CPT方法同期检出率。针对不同感染度小鼠的诊断,在感染14,18,22条尾蚴的小鼠中,所有小鼠均被预测为感染,准确性达100%,感染4、6、10条尾蚴组的小鼠预测准确率分别为40%（4/10）,50%（5/10）与80%（8/10）。结论：血清差异多肽检测法较血清抗体ELISA检测法至少提前2-3 w,较寄生虫学剖检极大的降低了工作量,可以用于低度感染状态下的实验小鼠检测和样本初筛,有望为“哨鼠”检测提供新的方法。3.2血清差异多肽检测法在血防“哨鼠”预警上的应用利用“哨鼠”监测长江水体血吸虫感染风险,是我省血防预警工作的重要手段,寄生虫学剖检查成虫与肝脏虫卵结节是判断“哨鼠”感染与否的主要手段,但时效性较差,且耗时耗力,需要发展新的快速检测方法。方法：剖检2015年现场试验的660只哨鼠（含栖霞与高淳60只、宁镇扬600只）并采集血清、5例本室保存的经解剖查成虫确诊的阳性“哨鼠”与50例阴性“哨鼠”血清,经血清多肽富集与质谱检测,获取多肽指纹图谱,并导入已建立的血清多肽检测方法（CPT法）验证。结果：5例阳性“哨鼠”与50例阴性“哨鼠”均可以被准确诊断,2015年现场试验的660只哨鼠经CPT验证为未感染,与寄生虫学剖检结果一致。结论：利用血清差异表达多肽检测方法,较常规“哨鼠”解剖查成虫方法,节省人力物力,并可以提早1-2w对“哨鼠”进行初筛,缩短了检测血吸虫感染的“窗口期”可与常规病原学检测方法联合应用于“哨鼠”早期预警。3.3血清差异多肽检测法在鉴别晚血病人上的应用晚期血吸虫病人的诊断及治疗是血防工作重点,尤其在低流行态势下,对血吸虫病地方考核更为重要。病原学检查与抗体检测,很难区别现症与既往病人。方法：采集晚血、新发展晚血、晚血治愈、健康对照四组人群,血清多肽指纹图谱检测并应用ClinProTools分析,建立基于新发晚血组与健康对照组血清差异多肽的检测方法。结果：晚血与新发晚血、新发晚血组中切脾与否在血清肽谱无显着差异。与健康对照组相比,晚血组在Mr 2662,2991,3241,5337与5906处均显着下调,在Mr 2082与4282处均显着上调；而有史治愈组与健康对照组比较发现,在Mr 2662,4209,5337与5906处显着下调,2082处显着上调。新发晚血组与有史对照组相比,在Mr 3241处显着下调。提示Mr 3241显着下调、4282显着上调可以作为判定新发晚血的指征,二级质谱鉴定并搜库,推测该两种多肽（蛋白）均为免疫球蛋白重链可变区。根据新发晚血组与健康对照组的差异表达多肽建立的诊断方法,盲测试验显示,晚血组、有史治愈组、无血吸虫感染组均与晚血病人具有一致的血清肽谱特征,而粪检阳性病人血清有73.3%（11/15）无法被验证,不能归于新发晚血或健康对照组,水阳江段流行病学调查获取的血清抗体阳性但粪检阴性样本有86.2%（25/29）被验证为晚血组。结论：血清差异多肽检测法可以间接将晚血病例与现症病例区分,但后者可能包括既往感染或反复感染,故有部分仍然被验证为晚血组,提示感染者有进一步发展为晚血病人的可能；水阳江段流行病学调查人群可能为既往感染,非现症病人；血清差异多肽检测联合常规寄生虫学检查,可以对血吸虫流行病学调查进行初筛。
二、野外自然与室内人工血吸虫感染性钉螺尾蚴感染小鼠的观察（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、野外自然与室内人工血吸虫感染性钉螺尾蚴感染小鼠的观察（论文提纲范文）
（1）基于LFD-RPA的主要肠道血吸虫核酸快速可视化检测方法的建立及初步评价（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 1 研究背景 |
| 1.1 血吸虫病流行概况 |
| 1.2 血吸虫病的实验检测技术 |
| 1.3 LFD-RPA检测技术 |
| 2 研究目的 |
| 3 研究内容 |
| 3.1 快速检测日本血吸虫核酸的LFD-RPA方法的建立及初步评价 |
| 3.2 快速检测曼氏血吸虫核酸的LFD-RPA方法的建立及初步评价 |
| 3.3 LFD-RPA检测方法的成本分析 |
| 4 技术路线图 |
| 第一部分 FD-RPA检测日本血吸虫核酸方法的建立及初步评价 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料来源 |
| 1.2 主要实验试剂与仪器 |
| 1.3 基因组DNA的提取 |
| 1.4 重组质粒的构建及提取 |
| 1.5 RPA方法的建立及初步评价 |
| 1.6 LFD-RPA方法的建立及初步评价 |
| 1.7 LFD-RPA方法的检测效能评价 |
| 2 结果 |
| 2.1 RPA方法的建立及初步评价 |
| 2.2 LFD-RPA方法的建立及初步评价 |
| 2.3 LFD-RPA方法的检测效能评价 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第二部分 LFD-RPA检测曼氏血吸虫核酸方法的建立及初步评价 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料来源 |
| 1.2 曼氏血吸虫感染小鼠实验模型构建及样本采集 |
| 1.3 主要实验试剂与仪器 |
| 1.4 基因组DNA的提取 |
| 1.5 重组质粒构建及平行PCR对照的建立 |
| 1.6 RPA方法的建立及初步评价 |
| 1.7 LFD-RPA方法的建立及初步评价 |
| 1.8 LFD-RPA对曼氏血吸虫感染小鼠模型样本的检测评价 |
| 2 结果 |
| 2.1 RPA方法的建立及初步评价 |
| 2.2 LFD-RPA方法的建立及初步评价 |
| 2.3 感染小鼠样本的检测评价 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第三部分 LFD-RPA反应的成本比较及分析 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 基础数据 |
| 2.2 仪器方面 |
| 2.3 技术要求方面 |
| 2.4 成本方面 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 主要创新点 |
| 不足和展望 |
| 参考文献 |
| 附表1 主要肠道血吸虫检测方法、特点及成本整理表 |
| 个人简历 |
| 硕士期间申请专利与发表文章 |
| 致谢 |
| 附件 |
（2）重组酶聚合酶扩增（RPA）技术检测日本血吸虫核酸方法的建立与初步评价（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 1 研究背景 |
| 1.1 血吸虫病流行概况 |
| 1.2 日本血吸虫病诊断技术 |
| 1.3 重组酶聚合酶扩增技术 |
| 2 研究目标 |
| 2.1 总体目标 |
| 2.2 具体目标 |
| 3 研究内容 |
| 3.1 系统评价各种核酸检测技术对日本血吸虫病的诊断价值 |
| 3.2 建立一种快速检测日本血吸虫核酸的RPA方法 |
| 3.3 初步评价RPA方法应用于日本血吸虫早期感染检测的效果 |
| 4 技术路线 |
| 第一部分 不同核酸检测技术对日本血吸虫病诊断价值的Meta分析 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 文献检索策略 |
| 1.2 纳入与排除标准 |
| 1.3 数据提取 |
| 1.4 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 文献的一般特征 |
| 2.2 文献质量评价 |
| 2.3 文献发表偏倚 |
| 2.4 Meta分析结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第二部分 RPA技术检测日本血吸虫核酸方法的建立 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料来源 |
| 1.2 样本的采集 |
| 1.3 主要实验试剂与仪器 |
| 1.4 基因组DNA的提取 |
| 1.5 重组质粒的构建及提取 |
| 1.6 RPA方法的建立 |
| 1.7 RPA方法特异性评价 |
| 1.8 RPA方法敏感性评价 |
| 1.9 日本血吸虫不同虫期基因组DNA的检测 |
| 1.10 混合钉螺样本的检测 |
| 1.11 RPA检测重复性评价 |
| 2 结果 |
| 2.1 RPA最佳反应条件的确定 |
| 2.2 RPA方法特异性评价 |
| 2.3 RPA方法敏感性评价 |
| 2.4 RPA方法检测日本血吸虫不同虫期样本 |
| 2.5 钉螺混合样本的检测 |
| 2.6 RPA方法的重复性评价 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 第三部分 RPA技术检测日本血吸虫感染样本效果的初步评价 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料来源 |
| 1.2 材料的采集 |
| 1.3 主要试剂及仪器 |
| 1.4 样本DNA的提取 |
| 1.5 RPA方法 |
| 1.6 PCR方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 小鼠样本的检测 |
| 2.2 钉螺样本的检测 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 全文小结 |
| 主要创新点 |
| 不足和展望 |
| 参考文献 |
| 个人简历 |
| 硕士期间申请专利与发表文章 |
| 致谢 |
| 附录 |
（3）miRNA在黄牛和水牛日本血吸虫感染中调节作用的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.1.1 血吸虫及我国血吸虫病的流行及防控形势 |
| 1.1.2 日本血吸虫生活史及宿主的适宜性 |
| 1.1.2.1 日本血吸虫生活史 |
| 1.1.2.2 宿主适宜性 |
| 1.1.2.3 水牛和黄牛是我国血吸虫病主要传染源 |
| 1.1.3 血吸虫感染的免疫 |
| 1.1.3.1 宿主对血吸虫感染的天然免疫应答 |
| 1.1.3.2 宿主对血吸虫感染的适应性免疫应答 |
| 1.1.4 micro RNA及其在血吸虫上的研究 |
| 1.1.4.1 血吸虫宿主miRNA研究进展 |
| 1.1.4.2 虫体miRNA研究进展 |
| 1.1.5 真核翻译起始因子eIF4A研究进展 |
| 1.2 研究目的及意义 |
| 1.3 研究内容与技术路线 |
| 1.3.1 黄牛和水牛来源日本血吸虫成虫miRNA表达谱的比较分析 |
| 1.3.2 黄牛和水牛感染日本血吸虫前后血浆miRNA表达谱及差异分析 |
| 1.3.3 黄牛和水牛感染日本血吸虫前后外周血单核细胞miRNA表达谱及差异分析 |
| 1.3.4 日本血吸虫真核翻译起始因子eIF4A的克隆表达与特性分析 |
| 第二章 黄牛与水牛来源日本血吸虫成虫miRNA表达谱的比较分析 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料 |
| 2.2.1 实验动物与尾蚴感染 |
| 2.2.2 主要仪器 |
| 2.2.3 主要试剂 |
| 2.2.4 主要溶液的配制 |
| 2.3 方法 |
| 2.3.1 水牛和黄牛来源日本血吸虫成虫的收集 |
| 2.3.2 虫体RNA的提取 |
| 2.3.3 small RNA文库构建 |
| 2.3.4 miRNA深度测序及数据分析 |
| 2.3.5 已知显着性差异表达的miRNAs验证 |
| 2.3.5.1 引物设计 |
| 2.3.5.2 虫体miRNA提取 |
| 2.3.5.3 miRNA cDNA第一链合成 |
| 2.3.5.4 miRNA荧光定量检测 |
| 2.3.6 差异表达miRNAs的靶基因筛选及q RT-PCR验证 |
| 2.3.7 双荧光素酶验证实验 |
| 2.3.7.1 HEK293T细胞的培养 |
| 2.3.7.2 双荧光素酶共表达载体的构建 |
| 2.3.7.3 转染实验 |
| 2.3.7.4 双荧光素酶报告基因活性检测 |
| 2.3.8 数据分析 |
| 2.4 结果 |
| 2.4.1 small RNA文库构建及深度测序概况 |
| 2.4.2 黄牛和水牛源日本血吸虫已知miRNAs的比较分析 |
| 2.4.3 日本血吸虫成虫新miRNA的初步鉴定 |
| 2.4.4 采用qRT-PCR法验证五个差异表达的已知miRNAs |
| 2.4.5 五个显着性差异表达miRNAs的靶基因预测 |
| 2.4.6 靶基因的功能富集分析 |
| 2.4.7 采用qRT-PCR验证差异表达miRNAs的靶基因 |
| 2.4.8 双荧光素酶验证结果 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 黄牛和水牛感染日本血吸虫前后血浆miRNA表达谱及差异分析 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料 |
| 3.2.1 实验动物与尾蚴感染 |
| 3.2.2 主要仪器 |
| 3.2.3 主要试剂 |
| 3.2.4 主要溶液的配制 |
| 3.3 方法 |
| 3.3.1 黄牛和水牛外周血的采集及血浆分离 |
| 3.3.2 血浆RNA的提取 |
| 3.3.3 small RNA文库构建 |
| 3.3.4 miRNA深度测序及数据分析 |
| 3.3.5 差异表达miRNAs的 q RT-PCR验证 |
| 3.3.5.1 差异表达miRNAs的引物设计 |
| 3.3.5.2 血浆miRNA提取及反转录 |
| 3.3.5.3 miRNA c DNA第一链合成 |
| 3.3.5.4 miRNA荧光定量检测 |
| 3.3.6 差异表达miRNAs的靶基因的q RT-PCR验证 |
| 3.4 结果 |
| 3.4.1 small RNA文库构建及深度测序概况 |
| 3.4.2 黄牛和水牛血浆已知miRNAs的比较分析 |
| 3.4.2.1 黄牛T1、T2、T3 时期血浆差异表达miRNAs的比较分析 |
| 3.4.2.2 水牛T1、T2、T3 时期血浆差异表达miRNAs的比较分析 |
| 3.4.2.3 T1、T2、T3 时期黄牛和水牛血浆差异表达miRNAs的比较分析 |
| 3.4.2.4 黄牛和水牛感染血吸虫后血浆差异表达miRNAs的比较分析 |
| 3.4.3 黄牛和水牛血浆新miRNAs的预测分析 |
| 3.4.4 差异表达miRNAs靶基因预测及靶基因功能的生物信息学分析 |
| 3.4.4.1 黄牛T1、T2、T3 时期血浆差异表达miRNAs的靶基因预测及功能分析 |
| 3.4.4.2 水牛T1、T2、T3 时期血浆差异表达miRNAs的靶基因预测及功能分析 |
| 3.4.4.3 黄牛和水牛在T1、T2、T3 时期血浆差异表达miRNAs的靶基因预测及功能分析 |
| 3.4.4.4 感染后不同时期黄牛和水牛血浆差异表达miRNAs的靶基因预测及功能分析 |
| 3.4.5 黄牛和水牛血浆差异表达miRNAs及其靶基因验证 |
| 3.4.5.1 黄牛和水牛各时期血浆差异表达miRNAs的验证 |
| 3.4.5.2 血浆差异miRNAs的靶基因验证 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 黄牛和水牛感染日本血吸虫前后外周血单核细胞miRNA表达谱及差异分析 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料 |
| 4.2.1 实验动物与尾蚴感染 |
| 4.2.2 主要仪器 |
| 4.2.3 主要试剂 |
| 4.2.4 主要溶液的配制 |
| 4.3 方法 |
| 4.3.1 黄牛和水牛外周血的采集及PBMC的分离 |
| 4.3.2 PBMC中 RNA的提取 |
| 4.3.3 small RNA文库构建 |
| 4.3.4 miRNA深度测序及数据分析 |
| 4.3.5 差异表达miRNAs的 q RT-PCR验证 |
| 4.3.5.1 差异表达miRNAs的引物设计 |
| 4.3.5.2 PBMC中 miRNA的提取 |
| 4.3.5.3 miRNA c DNA第一链合成 |
| 4.3.5.4 miRNA荧光定量检测 |
| 4.3.6 差异表达miRNAs的靶基因预测及q RT-PCR验证 |
| 4.4 结果 |
| 4.4.1 small RNA文库构建及深度测序概况 |
| 4.4.2 黄牛和水牛PBMC新 miRNAs的预测分析 |
| 4.4.3 黄牛和水牛PBMC已知miRNAs的比较分析 |
| 4.4.3.1 黄牛T1、T2、T3 时期PBMC差异表达miRNAs筛选及分析 |
| 4.4.3.2 水牛T1、T2、T3 时期PBMC差异表达miRNAs筛选及分析 |
| 4.4.3.3 T1、T2、T3 时期黄牛和水牛PBMC差异表达miRNAs的比较分析 |
| 4.4.3.4 不同感染时期黄牛和水牛PBMC差异表达miRNAs的比较分析 |
| 4.4.4 差异表达miRNAs的靶基因预测及靶基因功能的生物信息学分析 |
| 4.4.4.1 黄牛T1、T2、T3 时期PBMC差异miRNAs的靶基因预测及功能分析 |
| 4.4.4.2 水牛T1、T2、T3 时期PBMC差异miRNAs的靶基因预测及功能分析 |
| 4.4.4.3 黄牛和水牛T1、T2、T3 时期PBMC差异表达miRNAs的靶基因预测及功能分析 |
| 4.4.4.4 感染后不同时期黄牛和水牛PBMC差异表达miRNAs的靶基因预测及功能分析 |
| 4.4.5 黄牛和水牛PBMC差异表达miRNAs及其靶基因验证 |
| 4.4.5.1 黄牛和水牛各时期PBMC差异miRNAs的验证 |
| 4.4.5.2 PBMC差异miRNAs的靶基因验证 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 日本血吸虫真核翻译起始因子eIF4A的克隆表达与特性分析 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料 |
| 5.2.1 实验动物和尾蚴 |
| 5.2.2 主要试剂 |
| 5.2.3 主要仪器及设备 |
| 5.2.4 主要试剂配制 |
| 5.3 方法 |
| 5.3.1 Sj-eIF4A的生物信息学分析 |
| 5.3.2 Sj-eIF4A在日本血吸虫不同发育时期虫体内的转录水平分析 |
| 5.3.2.1 不同发育时期的虫体收集 |
| 5.3.2.2 虫体RNA提取 |
| 5.3.2.3 虫体RNA反转为c DNA及 q RT-PCR分析 |
| 5.3.3 Sj-eIF4A基因在日本血吸虫不同适宜性宿主来源虫体内的转录水平分析 |
| 5.3.3.1 不同宿主来源虫体的收集 |
| 5.3.3.2 虫体RNA的提取 |
| 5.3.3.3 虫体RNA反转为c DNA及 q RT-PCR分析 |
| 5.3.4 原核表达质粒的构建 |
| 5.3.5 重组蛋白r Sj-eIF4A的表达与纯化 |
| 5.3.6 Sj-eIF4A基因特异性si RNA的筛选 |
| 5.3.6.1 Sj-eIF4A基因si RNA的合成 |
| 5.3.6.2 虫体的收集与体外培养 |
| 5.3.6.3 Sj-eIF4A基因的干扰效果分析 |
| 5.3.7 Sj-eIF4A基因体外最佳干扰时间的筛选 |
| 5.3.8 Sj-eIF4A基因的体内干扰实验 |
| 5.3.9 Sj-eIF4A基因的体外干扰实验 |
| 5.3.9.1 虫体收集与RNA长期干扰 |
| 5.3.9.2 体外长期干扰虫体结构变化观察 |
| 5.3.10 统计学分析 |
| 5.4 结果 |
| 5.4.1 Sj-eIF4A基因的扩增与重组表达质粒的构建 |
| 5.4.2 日本血吸虫Sj-eIF4A基因的生物信息学分析 |
| 5.4.3 r Sj-eIF4A蛋白的纯化 |
| 5.4.4 Sj-eIF4A基因在日本血吸虫不同发育时期的转录水平分析 |
| 5.4.5 Sj-eIF4A基因在日本血吸虫不同适宜性宿主来源虫体内的转录水平分析 |
| 5.4.6 siRNA干扰效果分析 |
| 5.4.7 RNA干扰引起Sj-eIF4A基因沉默的最佳时间分析 |
| 5.4.8 体内干扰Sj-eIF4A基因表达对虫荷数和肝脏虫卵数的影响 |
| 5.4.9 体外干扰Sj-eIF4A基因表达对虫卵的影响 |
| 5.4.10 体外干扰Sj-eIF4A基因对虫体形态的影响 |
| 5.5 小结 |
| 第六章 全文讨论与总结 |
| 6.1 全文讨论 |
| 6.1.1 黄牛和水牛来源日本血吸虫成虫miRNA表达谱的比较分析 |
| 6.1.2 黄牛和水牛血浆miRNA在日本血吸虫感染前后的表达谱分析 |
| 6.1.3 黄牛和水牛外周血单核细胞miRNA在日本血吸虫感染前后的表达谱分析 |
| 6.1.4 日本血吸虫真核翻译起始因子eIF4A基因的克隆表达与特性分析 |
| 6.2 全文总结 |
| 6.3 创新点 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 A 日本血吸虫 miRNA 测序流程图及Hsc20 扩增序列 |
| 附录 B 攻读博士学位期间主要学术成果和参加学术会议情况 |
（4）日本血吸虫与曼氏血吸虫的杂交及杂交虫株生物学特性的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一部分 日本血吸虫与曼氏血吸虫杂交虫株的构建 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 日本血吸虫与曼氏血吸虫杂交虫株的生物学特性 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第三部分 日本血吸虫与曼氏血吸虫杂交虫株的分子标记 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 硕士在读期间发表论文及参与课题 |
| 致谢 |
（5）日本血吸虫SjELAV-like 1基因的克隆、表达及功能的初步研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 血吸虫概述 |
| 1.1.1 血吸虫的概况及防治 |
| 1.1.2 血吸虫的生活史 |
| 1.1.3 雌雄合抱是产卵、致病和传播的基础 |
| 1.2 胚胎致死异常视觉(ELAV)基因家族 |
| 1.2.1 ELAV概述 |
| 1.2.2 ELAV-like 1 概述 |
| 1.3 分子生物学技术及其应用 |
| 1.3.1 生物质谱技术 |
| 1.3.2 RNA干扰(RNAi)技术 |
| 1.3.3 电子显微镜技术 |
| 第二章 SjELAV-like 1 克隆、表达情况分析及组织定位 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 菌种、质粒、血清和实验动物 |
| 2.1.2 生化试剂 |
| 2.1.3 实验仪器 |
| 2.1.4 主要试剂配制 |
| 2.2 实验步骤 |
| 2.2.1 虫体的收集 |
| 2.2.2 SjELAV-like 1 基因的克隆 |
| 2.2.3 重组质粒p ET28a-SjELAV-like 1 的构建 |
| 2.2.4 SjELAV-like 1 的原核表达及重组蛋白的纯化 |
| 2.2.5 rSjELAV-like 1 重组蛋白多克隆抗体制备及Western Blot分析 |
| 2.2.6 SjELAV-like 1 在不同时期、不同状态虫体内转录水平分析 |
| 2.2.7 SjELAV-like 1 蛋白在虫体的定位分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 SjELAV-like 1 基因的克隆及分析 |
| 2.3.2 SjELAV-like 1 基因的原核表达 |
| 2.3.3 SjELAV-like 1 蛋白具有较好的免疫原性 |
| 2.3.4 SjELAV-like 1 在不同时期虫体不同状态虫体内的表达情况 |
| 2.3.5 SjELAV-like 1 蛋白在虫体中主要分布于体被 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 SjELAV-like 1 沉默对日本血吸虫的生物学影响 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 主要试剂 |
| 3.1.3 主要仪器 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 siRNA的筛选 |
| 3.2.2 siRNA的长期干扰 |
| 3.2.3 RNAi引起SjELAV-like 1 的沉默效果 |
| 3.2.4 SjELAV-like 1 沉默对虫体生物学的影响 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 SjELAV-like 1 沉默效果检测 |
| 3.3.2 SjELAV-like 1 沉默肝脏荷卵数减少率和卵胚孵化减少率 |
| 3.3.3 SjELAV-like 1 沉默对虫体体被结构的影响 |
| 3.3.4 SjELAV-like 1 沉默对虫体生殖器官的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| Abstract |
| 英文缩略表 |
| 致谢 |
（6）日本血吸虫在钉螺体内被生物控制的分子机制初步探究以及MIF细胞因子在湖北钉螺对日本血吸虫免疫反应过程中的功能分析（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 血吸虫病与血吸虫 |
| 1.2 日本血吸虫 |
| 1.2.1 日本血吸虫的生活史 |
| 1.2.2 日本血吸虫的形态结构 |
| 1.2.3 日本血吸虫病的症状 |
| 1.2.4 中国血吸虫病的流行趋势及防治情况 |
| 1.3 湖北钉螺 |
| 1.3.1 湖北钉螺的分布及分类 |
| 1.3.2 湖北钉螺的形态结构及发育 |
| 1.4 外睾吸虫及其生活史 |
| 1.5 日本血吸虫幼虫在钉螺体内的生物控制 |
| 1.6 转录组比较分析湖北钉螺MIF (OhMIF)的差异表达 |
| 1.7 巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)的研究进展 |
| 1.7.1 MIF的发现 |
| 1.7.2 MIF的结构 |
| 1.7.3 MIF的生物学功能 |
| 1.8 立题背景及依据 |
| 第二章 鄱阳湖区生物控制资源初步调查及湖北钉螺MIF的鉴定与序列分析 |
| 2.1 实验目的 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 材料 |
| 2.2.2 方法 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 鄱阳湖区野生鲶鱼外睾吸虫感染情况调查与统计 |
| 2.3.2 鄱阳湖区钉螺外睾吸虫及血吸虫感染情况调查与统计 |
| 2.3.3 OhMIF在四种不同感染情况钉螺中表达情况的验证 |
| 2.3.4 OhMIF的编码序列及理化性质分析 |
| 2.3.5 OhMIF多重序列比对及分析 |
| 2.3.6 OhMIF系统进化树的构建与分析 |
| 2.3.7 OhMIF的结构预测及分析 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 湖北钉螺MIF细胞因子生物学活性的检测与分析 |
| 3.1 实验目的 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 材料 |
| 3.2.2 方法 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 湖北钉螺总RNA的提取 |
| 3.3.2 OhMIF基因的克隆以及原核表达载体的构建 |
| 3.3.3 OhMIF基因的原核诱导表达、纯化及浓缩 |
| 3.3.4 重组OhMIF蛋白多巴胺互变异构酶活性初步测定 |
| 3.3.5 氨基酸位点特异性突变 |
| 3.3.6 N端脯氨酸对于重组OhMIF多巴胺互变异构酶活性是必需的 |
| 3.3.7 ISO-1可有效地抑制重组OhMIF多巴胺互变异构酶的活性 |
| 3.3.8 重组OhMIF多巴胺互变异构酶动力学常数的测定 |
| 3.3.9 重组OhMIF氧化还原酶活性的检测 |
| 3.3.10 OhMIF抗血清的制备与纯化 |
| 3.3.11 互变异构酶活性对于OhMIF促进ERK1/2信号通路的活化并不是必需的 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 MIF细胞因子在湖北钉螺对日本血吸虫免疫反应过程中的功能分析 |
| 4.1 实验目的 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 材料 |
| 4.2.2 方法 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 OhMIF在日本血吸虫感染不同时期的表达量变化 |
| 4.3.2 OhMIF在湖北钉螺体内的组织分布 |
| 4.3.3 OhMIF在湖北钉螺血淋巴细胞中的表达与定位 |
| 4.3.4 dsRNA介导的OhMIF表达水平的敲低 |
| 4.3.4.1 OhMIF dsRNA的合成 |
| 4.3.4.2 OhMIF表达水平的敲低及检测 |
| 4.3.5 湖北钉螺血淋巴细胞的鉴定与分类 |
| 4.3.5.1 基于血淋巴细胞的体积进行分类 |
| 4.3.5.2 基于血淋巴细胞的颗粒密度进行分类 |
| 4.3.6 敲低OhMIF表达水平能明显减少吞噬性血淋巴细胞的比例 |
| 4.3.7 OhMIF在血淋巴细胞的成熟与分化过程中起着重要的作用 |
| 4.3.8 OhMIF能够促进血淋巴细胞对日本血吸虫抗原的迁移和附着 |
| 4.3.8.1 OhMIF在湖北钉螺体内能够促进血淋巴细胞向血吸虫感染部位的迁移 |
| 4.3.8.2 OhMIF能够在体外促进血淋巴细胞向血吸虫抗原的迁移和附着 |
| 4.4 讨论 |
| 第五章 湖北钉螺转录组和蛋白质组相结合鉴定生物控制血吸虫过程中差异表达的分子 |
| 5.1 实验目的 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 材料 |
| 5.2.2 方法 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.3.1 阴性湖北钉螺转录组分析 |
| 5.3.1.1 湖北钉螺原始转录组测序数据统计 |
| 5.3.1.2 转录组数据的从头组装 |
| 5.3.1.3 转录组数据基因注释信息统计 |
| 5.3.1.4 转录组数据基因功能注释结果分析 |
| 5.3.2 四种不同感染况钉螺全蛋白的完整性鉴定 |
| 5.3.3 利用iTRAQ技术对钉螺蛋白质组的测定与质量评估 |
| 5.3.3.1 肽段匹配误差分布 |
| 5.3.3.2 钉螺蛋白质鉴定的基本信息 |
| 5.3.4 iTRAQ蛋白质组学全谱分析 |
| 5.3.4.1 GO功能分类注释分析 |
| 5.3.4.2 KOG功能注释分类分析 |
| 5.3.4.3 KEGG注释通路分类分析 |
| 5.3.5 差异表达蛋白的鉴定与分析 |
| 5.3.5.1 差异表达蛋白统计 |
| 5.3.5.2 差异表达蛋白功能注释分析 |
| 5.4 讨论 |
| 总结与展望 |
| 附录1 图表索引 |
| 附录2 缩略语及中英文对照 |
| 参考文献 |
| 在学期间发表的文章 |
| 致谢 |
（7）氯硝柳胺微乳剂的研制及对血吸虫感染的防护效果评价（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 氯硝柳胺微乳的制备 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第二章 氯硝柳胺微乳的理化性质及稳定性的评价 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三章 氯硝柳胺微乳防护效果评价 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 研究生期间发表的文章 |
| 致谢 |
（8）我国某山区血吸虫病流行区2012～2015年日本血吸虫的群体遗传学分析（论文提纲范文）
| 中文摘要 abstract 引言 第一部分 利用日本血吸虫家系标本分析微卫星的基因分型错误 |
| 材料与方法 |
| 1. 材料 |
| 2. 方法 |
| 结果 |
| 1. 实验血吸虫一般遗传特征 |
| 2. 基因分型错误 |
| 3. 家系分析 |
| 讨论 |
| 注 第二部分 我国某山区血吸虫病流行区 2012～2015 年日本血吸虫的群体遗传学分析 |
| 材料与方法 |
| 1. 材料 |
| 2. 主要仪器与试剂 |
| 3. 方法 |
| 结果 |
| 1. 血吸虫基因型个数 |
| 2. 血吸虫种群遗传多样性 |
| 3. 血吸虫种群间遗传分化 |
| 4. 群体遗传结构 |
| 5. 瓶颈效应 |
| 讨论 结论 参考文献 综述：中国境内野鼠在日本血吸虫病传播中的作用 |
| 参考文献 攻读学位期间发表论文 附录 致谢 |
（9）日本血吸虫单性感染虫体与复性感染虫体的比较（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 阴性钉螺的获得 |
| 1.3 单性感染阳性钉螺的获得 |
| 1.4单性感染实验 |
| 1.5 复性感染实验 |
| 1.6 虫体观察实验 |
| 2 结果 |
| 2.1 获得单性感染的阳性钉螺 |
| 2.2 单性感染结果 |
| 2.3 复性感染结果 |
| 3 讨论 |
（10）南京地区日本血吸虫病的流行病学调查及其基于血清差异多肽检测方法的建立与应用（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 前言 |
| 第一章 血吸虫病研究概况与防治技术进展 |
| 1 血吸虫与钉螺 |
| 1.1 血吸虫的发现及其病原学 |
| 1.2 血吸虫生活史 |
| 1.3 吸虫病分布流行 |
| 1.4 血吸虫传播流行的中间宿主 |
| 2 血吸虫病防治技术 |
| 2.1 血吸虫病诊断与预警 |
| 2.2 血吸虫病治疗研究进展 |
| 2.3 我国血吸虫病防治现状与进展 |
| 参考文献 |
| 第二章 南京地区钉螺及其尾蚴感染的抽样调查 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 南京地区人与家畜感染日本血吸虫的抽样调查 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四章 基于血清差异多肽检测日本血吸虫病方法的建立 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第五章 血清差异多肽检测法在实验小鼠模型的应用 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第六章 血清差异多肽检测法在血防“哨鼠”预警上的应用 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 第七章 血清差异多肽检测法在鉴别晚血病人上的应用 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 总结 |
| 附表 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文、申请专利及专着 |
四、野外自然与室内人工血吸虫感染性钉螺尾蚴感染小鼠的观察（论文参考文献）
- [1]基于LFD-RPA的主要肠道血吸虫核酸快速可视化检测方法的建立及初步评价[D]. 王丽萍. 中国疾病预防控制中心, 2021
- [2]重组酶聚合酶扩增（RPA）技术检测日本血吸虫核酸方法的建立与初步评价[D]. 王盛琳. 中国疾病预防控制中心, 2020
- [3]miRNA在黄牛和水牛日本血吸虫感染中调节作用的研究[D]. 余新刚. 华南农业大学, 2019
- [4]日本血吸虫与曼氏血吸虫的杂交及杂交虫株生物学特性的研究[D]. 石锋. 江苏省血吸虫病防治研究所, 2019(09)
- [5]日本血吸虫SjELAV-like 1基因的克隆、表达及功能的初步研究[D]. 许蓉. 山西农业大学, 2018
- [6]日本血吸虫在钉螺体内被生物控制的分子机制初步探究以及MIF细胞因子在湖北钉螺对日本血吸虫免疫反应过程中的功能分析[D]. 黄帅钦. 厦门大学, 2018(08)
- [7]氯硝柳胺微乳剂的研制及对血吸虫感染的防护效果评价[D]. 李雪. 江苏省血吸虫病防治研究所, 2017(01)
- [8]我国某山区血吸虫病流行区2012～2015年日本血吸虫的群体遗传学分析[D]. 高雨蒙. 苏州大学, 2017(04)
- [9]日本血吸虫单性感染虫体与复性感染虫体的比较[J]. 杨佩才,张洪英,谢朝勇,殷位刚,周玮. 中国血吸虫病防治杂志, 2016(06)
- [10]南京地区日本血吸虫病的流行病学调查及其基于血清差异多肽检测方法的建立与应用[D]. 黄玉政. 扬州大学, 2016(02)