人血管内皮生长因子165克隆表达及其生物学功能的研究

论文摘要

目的:构建人血管内皮生长因子 165（Vascular endothelial growthfactor 165,VEGF165）原核表达载体并在大肠杆菌中诱导表达。构建VEGF165 真核表达载体并将其转入人慢性髓系白血病急变细胞株K562 中,研究其对 K562 增殖和凋亡的影响,进一步验证 VEGF165通过自分泌途径对肿瘤生长发挥作用,从而为临床上恶性血液病抗血管新生治疗的部分机理提供实验依据。 方法:用 RT-PCR 法从人白血病细胞株 TF1 扩增 VEGF165 完整编码序列（不包含前面 81bp 的信号肽序列及终止密码子）,将其插入质粒pUCmT中并测序鉴定。将测序正确的pUCmT-VEGF165与PET20b（+）均用 EcoRI 和 SalI 双酶切,回收纯化目的基因片段与表达载体,构建VEGF165 的 原 核 表 达 载 体 PET20b-VEGF165, 转 化 大 肠 杆 菌BL21（DE3）pLysS,IPTG 诱导表达,表达产物用 Ni-NTA Resin 纯化,SDS-PAGE 及 Western Blot 鉴定重组蛋白。用 RT-PCR 法从人白血病细胞株 HL60 扩增 VEGF165 完整编码序列, 将其插入质粒 pUCmT 中并测序鉴定。将测序正确的 pUCmT-VEGF165 与 pcDNA3.1（-）均用 EcoR I和 HindⅢ双酶切,回收纯化目的基因片段与表达载体,构建 VEGF165的真核表达载体 pcDNA3.1-VEGF165。用脂质体介导的方法转染人慢性髓系白血病急变细胞株 K562,G418 筛选转染阳性的细胞株。RT-PCR和Western Blot检测VEGF165在RNA水平和蛋白水平的表达。用MTT

论文目录

• 一、论文
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• （三） 前言
• （四） 第一部分 VEGF165 原核表达载体的构建
• （五） 第二部分 VEGF165 在大肠杆菌中的表达、纯化、复性
• （六） 第三部分 VEGF165 真核表达载体的构建
• （七） 第四部分 VEGF165 对K562 增殖和凋亡的影响
• （七） 结论
• （八） 参考文献
• 二、文献综述
• （一） 正文
• （二） 参考文献
• 三、致谢