OPN对体外培养人OA软骨细胞MMP13表达的影响

论文摘要

目的：采用骨桥蛋白干预体外培养的人骨关节炎软骨细胞,观察细胞生物学特性,检测细胞培养上清液中MMP13的水平,探讨骨桥蛋白参与人骨关节炎发病的可能机理。方法：1、采用Ⅱ型胶原酶消化法处理人关节软骨标本获取大量高纯度的软骨细胞,采用Ⅱ型胶原免疫组化法对其进行鉴定,台盼蓝染色法检测软骨细胞的存活率。2、正常关节软骨细胞(A组)和OA关节软骨细胞(B组)分别在空白和三种不同浓度OPN的干预作用下进行培养：A1组(正常软骨细胞空白对照组),A2组(正常软骨细胞2ng/ml OPN干预组),A3组(正常软骨细胞4ng/ml OPN干预组),A4组(正常软骨细胞6ng/ml OPN干预组), B1组(OA软骨细胞空白对照组),B2组(OA软骨细胞2ng/ml OPN干预组),B3组(OA软骨细胞4ng/ml OPN干预组),B4组(OA软骨细胞6ng/ml OPN干预组),MTT比色法检测细胞存活及生长情况；3、软骨细胞培养48小时后,应用ELISA法检测培养上清液中MMP13的水平。结果：1、原代人正常软骨细胞(A组)和OA软骨细胞(B组)存活率分别为(95±1.0)%和(95±1.0)%,无显著性差异(P>0.05)；2、加入OPN后倒置显微镜下观察各组细胞间贴壁情况无明显差别；细胞存活率分别为A1组(98±1.0)%；A2组(97±1.0)%；A3组(98±1.0)%；A4组(97.5±1.0)%；B1组(98.7±0.6)%；B2组(97.7±0.6)%；B3组(98±1.0)%；B4组(97.7±1.5)%；各组间无显著性差异(P>0.05)；3、软骨细胞培养上清液MMP13水平比较结果：OPN干预正常软骨细胞后各组间MMP13水平无显著性差异(P>0.05)。OPN干预OA软骨细胞后,B2组与B1组、B4组与B1组间比较MMP13表达有显著性差异(P<0.05),其他各组间无显著性差异(P>0.05)。结论：1、本实验观察到体外培养OA软骨细胞和正常软骨细胞存活率无差异。2、本实验观察到OPN对体外培养OA软骨细胞和正常软骨细胞存活率无明显影响。3、本实验观察到OPN不影响正常关节软骨细胞MMP13表达,2ng/ml和6ng/ml的OPN可以增强OA软骨细胞MMP13表达。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略词
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 2.1 临床资料
• 2.2 主要实验仪器
• 2.3 主要试剂
• 2.4 实验方法
• 2.5 统计分析
• 第三章 结果
• 3.1 体外培养人关节软骨细胞及鉴定
• 3.2 OPN干预对正常软骨细胞和OA软骨细胞生长的影响
• 3.3 软骨细胞培养上清液MMP13水平比较
• 第四章 讨论
• 4.1 人软骨细胞的体外培养
• 4.2 OPN对体外培养OA软骨细胞和正常软骨细胞存活率的影响
• 4.3 OPN对正常软骨细胞与OA软骨细胞MMP13表达的影响
• 第五章 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士期间的主要研究成果