论文摘要
目的 以海藻酸钠（alginate）为载体和支架,探讨在体外人骨髓间充质干细胞（Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells,BMSCs）定向分化为软骨样组织的可行性及实验条件,为软骨组织工程及临床应用提供依据。 方法 采集5名健康成人骨髓标本5～10ml,梯度密度分离骨髓有核细胞,经培养分离BMSCs并进行传代扩增。观察在体外单层培养条件下BMSCs形态及生长特点。消化收集P3～4代细胞,将BMSCs（5×106/ml）与海藻酸钠复合并制成凝胶状细胞珠（20 μL/个）,依据诱导培养基中不同浓度rhTGF-β1（0,1,10,50,100ng/ml）,分为A、B、C、D、E、5组,于诱导培养第3周分别取各组海藻酸钠珠,采用免疫组化、原位杂交定性分析Ⅱ型胶原合成及mRNA表达,AB-PAS染色评估蛋白多糖的合成。于诱导培养第1,3,5周采用酶标染色定量检测海藻酸钠珠中蛋白多糖的含量。 结果 密度梯度离心后,活细胞比例在95%以上,贴壁后的细胞形态均一,呈纺锤形。原代细胞生长潜伏期较长,一般为3～5天,传代细胞生长迅速,倍增率峰值出现在第4天,P1～3传代细胞增殖能力无显著变化。3周时,10ng/ml TGF-β1诱导组海藻酸钠珠石蜡切片Ⅱ型胶原免疫组化及Ⅱ型胶原mRNA原位杂交均表现为阳性,AB-PAS染色阳性。50ng/ml、100ng/ml组Ⅱ型胶原免疫组化、原位杂交以及AB-PAS染色均为弱阳性。1ng/ml组Ⅱ型胶原免疫组化及原位杂交均为阴性,AB-PAS染色弱阳性,0ng/ml组Ⅱ型胶原免疫组化、原位杂交以及AB-PAS染色均为阴性。不同诱导时间,10ng/ml TGF-β1诱导组海藻酸钠珠中蛋白多糖含量高于其它实验组（P<0.05）。相同周次,50ng/ml与100ng/ml蛋白多糖含量无显著差异,但均高于0ng/ml和1ng/ml（P<0.01）。1ng/ml组
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