三叶青总黄酮的提取和纯化工艺研究

论文摘要

三叶青是一种民间常用的中草药,具有清热解毒、祛风化痰、活血止痛的功能。据药理实验研究表明三叶青黄酮具有抗肿瘤、保肝等药理作用。但目前对三叶青黄酮提取和纯化工艺方面的研究报道还很少。为更好的开发利用该资源,本文主要围绕三叶青总黄酮的提取和纯化工艺进行研究。用紫外/可见分光光度法建立了三叶青总黄酮的含量分析方法。三叶青黄酮在NaNO2-Al（NO3）3比色法显色后,用紫外分光光度计在波长500nm处测定显色吸光度。采用传统的紫外分光光度法在该实验过程中显色后产生红色絮状沉淀,严重干扰了吸光度的测定。采用离心法改进后,排除了杂质的干扰,且简单可行。选择芦丁为标样,绘制标准曲线后得到芦丁含量C（μg/mL）与吸光度A的回归方程:A=0.01018C+0.00809,线性良好（R=0.99965）。实际样品的平均加样回收率为98.95%-100.51%。用乙醇作为提取溶剂研究了三叶青总黄酮的提取工艺。通过单因素实验考察及正交实验优化得到三叶青总黄酮的较佳提取工艺为:提取溶剂60%（v/v）的乙醇溶液,液固比6:1,水浴沸腾提取两次,每次1.5h。在此适宜条件下,三叶青总黄酮得率约为26mg/g左右。用大孔吸附树脂法研究了三叶青总黄酮的纯化工艺。选择了10种极性不同,孔径、比表面积等性能参数各异的国产大孔吸附树脂,比较其对三叶青黄酮的吸附量和解吸率等指标,筛选较优的树脂并对其进行静态和动态吸附解吸性能的研究。结果表明HPD826吸附树脂对三叶青黄酮有较好的吸附和解吸性能。优化后得到较佳的动态吸附和解吸工艺:上样浓度范围在3.2-5.0mg/mL内,上样流速2BV/h为佳;上样后先用水洗脱2BV,在用70%（v/v）的乙醇溶液以2BV/h的流速洗脱,可在3BV左右基本解吸三叶青黄酮,解吸后的三叶青纯化物纯度可达38.40%,较粗提物提高3倍。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1.1 三叶青研究概况
• 1.1.1 三叶青化学成分研究
• 1.1.2 三叶青药理研究
• 1.1.3 临床应用
• 1.2 黄酮类物质
• 1.2.1 黄酮类物质化学结构及理化性质
• 1.2.2 黄酮类物质的生物活性
• 1.2.3 黄酮类物质的检测方法
• 1.2.4 黄酮类物质的提取方法
• 1.2.5 黄酮类物质的分离与纯化方法
• 1.3 大孔树脂吸附技术
• 1.3.1 大孔树脂吸附技术简介
• 1.3.2 大孔树脂的应用
• 1.4 课题意义和内容
• 1.4.1 课题背景和意义
• 1.4.2 研究内容
• 第二章 三叶青总黄酮分析方法的建立
• 2.1 引言
• 2.2 实验材料和仪器
• 2.2.1 实验材料
• 2.2.2 实验仪器
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 样品处理方法
• 2.3.2 标准溶液的配制
• 2.3.3 最大吸收波长的选取
• 2.3.4 标准曲线的绘制
• 2.3.5 样品溶液配制
• 2.3.6 精密度考察
• 2.3.7 稳定性考察
• 2.3.8 重现性考察
• 2.3.9 线性关系考察
• 2.3.10 加样回收率
• 2.4 结果与讨论
• 2.4.1 最大吸收波长的选择
• 2.4.2 标准曲线的绘制
• 2.4.3 精密度
• 2.4.4 稳定性
• 2.4.5 重现性
• 2.4.6 线性关系
• 2.4.7 加样回收率
• 2.5 小结
• 第三章 三叶青总黄酮的提取工艺研究
• 3.1 引言
• 3.2 实验材料和仪器
• 3.2.1 实验材料
• 3.2.2 实验仪器
• 3.3 实验方法
• 3.3.1 三叶青前处理及实验方法
• 3.3.2 三叶青总黄酮分析方法
• 3.3.3 三叶青总黄酮提取得率计算
• 3.3.4 乙醇浓度的考察
• 3.3.5 水浴温度的考察
• 3.3.6 液固比的考察
• 3.3.7 提取时间的考察
• 3.3.8 提取次数的考察
• 3.3.9 正交实验设计
• 3.4 结果与讨论
• 3.4.1 乙醇浓度的确定
• 3.4.2 水浴温度的确定
• 3.4.3 液固比的确定
• 3.4.4 提取时间的确定
• 3.4.5 提取次数的确定
• 3.4.6 正交实验结果
• 3.4.7 较优提取工艺条件的确定
• 3.5 小结
• 第四章 三叶青总黄酮的纯化工艺研究
• 4.1 引言
• 4.2 实验材料和仪器
• 4.2.1 实验材料
• 4.2.2 实验仪器
• 4.2.3 大孔树脂
• 4.3 实验方法
• 4.3.1 树脂预处理
• 4.3.2 含水量测定
• 4.3.3 原料液的制备
• 4.3.4 大孔树脂静态吸附量的测定
• 4.3.5 大孔树脂静态解吸量的测定
• 4.3.6 静态吸附动力学研究
• 4.3.7 静态吸附等温线测定
• 4.3.8 大孔树脂吸附三叶青总黄酮的热力学研究
• 4.3.9 乙醇浓度对解吸率的影响
• 4.3.10 穿透曲线的测定
• 4.3.11 动态解吸实验
• 4.4 结果与讨论
• 4.4.1 十种树脂含水量的测定
• 4.4.2 静态吸附
• 4.4.3 静态动力学研究
• 4.4.4 温度对静态吸附动力学的影响
• 4.4.5 初始浓度对静态吸附动力学的影响
• 4.4.6 静态吸附等温线
• 4.4.7 热力学研究
• 4.4.8 乙醇浓度对树脂解吸率的影响
• 4.4.9 空隙率和沉降密度的测定
• 4.4.10 穿透曲线
• 4.4.11 上样浓度对吸附量的影响
• 4.4.12 上样流速对吸附量的影响
• 4.4.13 动态解吸实验
• 4.4.14 三叶青黄酮类化合物性质的初探
• 4.5 小结
• 第五章 结论与展望
• 5.1 结论
• 5.2 展望
• 参考文献
• 作者简介