论文摘要
目的：利用microRNA（miRNA）靶向干扰人蛋白质精氨酸甲基转移酶2（proteinarginine methyltransferase2, PRMT2）基因表达，鉴定其稳定转染乳腺癌细胞株MCF7后对细胞增殖的影响。方法：以脂质体LipofectamineTM2000为载体，将针对特异靶点PRMT2基因的miRNA稳定转染入乳腺癌细胞MCF7中。采用间接免疫荧光法和western blot法检测重组体对PRMT2的干扰效果以确定其生物活性。采用结晶紫实验检测重组体转染对MCF7细胞体外增殖的影响，平板克隆形成实验检测MCF7细胞克隆形成能力的影响。流式细胞技术（flow cytometry, FCM）检测重组体转染对MCF7细胞周期的影响。结果：1．构建的重组体插入片段的碱基序列完全正确，间接免疫荧光法和westernblotting法检测表明：重组体稳定转染MCF7细胞后可成功干扰PRMT2基因的表达。2．结晶紫实验表明：在无雌激素作用时，重组体转染对细胞的生长速度无明显影响；与转染空载体的MCF7细胞相比，在10nmol/L E2作用下，转染重组体的MCF7细胞的增殖速度明显增加（P＜0.05），在100nmol/L雌激素受体拮抗剂4OHT作用下，重组体组对MCF7细胞的增殖无明显影响。3．Western blotting法检测表明：重组体能够增加雌激素介导的ERα目标基因CyclinD1和c-Myc的表达。4．平板克隆形成实验表明，重组体能够促进雌激素介导的MCF7细胞的克隆形成。5．FCM法检测表明，转染重组体的MCF7细胞中G2期细胞比例明显升高（P＜0.05）。结论：1．成功构建靶向PRMT2基因的microRNA真核表达载体，并成功构建了稳定低表达PRMT2的MCF7细胞系。2．抑制PRMT2的表达能够提高雌激素介导的MCF7细胞的增殖和克隆形成能力。3．抑制PRMT2的表达能够上调雌激素受体α目标基因CyclinD1和c-Myc的表达，促进细胞周期进程。
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