忍冬茎叶化学成分及其抑菌活性的研究

论文摘要

忍冬（Lonicera japonica Thunb.）为忍冬科（Caprifoliaceae）忍冬属（Lonicera）常绿藤木植物,是我国传统常用中药,以其茎、叶、花入药,具有清热解毒、抗菌消炎、保肝利胆等功效。忍冬茎叶与忍冬花蕾中的化学成分类似,含有很多药理活性较强的成分。本论文以汉中产忍冬为研究对象,在预试基础上,利用分光光度法测定了有效成分在忍冬地上部含量分布;利用滤纸片法测定忍冬茎叶醇提物不同部分的抑菌活性;另外,利用层析等技术对忍冬茎叶中的化学成分进行分离纯化及结构鉴定。主要结果如下:1.采用试管预试法对忍冬茎叶的化学成分进行系统预试,并与忍冬花蕾进行比较。结果表明:忍冬茎叶与忍冬花蕾所含化学成分相似,均检出了酚性成分、鞣质、黄酮及其苷类、糖及其苷类、皂苷、甾体、萜类、氨基酸、多肽、蛋白质、挥发油及油脂类成分;未检出生物碱、蒽醌及其苷、香豆素及其苷、强心苷类成分,可能含有酯类及内酯成分。2.采用紫外可见分光光度法测定了忍冬茎叶中总酚酸、总黄酮及可溶性糖的含量,并与忍冬花蕾及野生忍冬花蕾进行对比。结果表明:忍冬茎叶中的总酚酸、总黄酮及可溶性总糖的含量分别是12.74mg·g-1、21.64mg·g-1、77.40mg·g-1;总酚酸含量由低到高的顺序是:忍冬茎叶<野生忍冬花蕾<忍冬花蕾,其中忍冬茎叶中的总酚酸含量分别是忍冬花蕾及野生忍冬花蕾的32.53%、41.11%;总黄酮含量由低到高的顺序是:野生忍冬花蕾<忍冬茎叶<忍冬花蕾,其中忍冬茎叶中总黄酮的含量分别是忍冬花蕾及野生忍冬花蕾的18.07%、259.16%;可溶性糖含量由低到高的顺序是:野生忍冬花蕾<忍冬花蕾<忍冬茎叶,其中忍冬茎叶中可溶性糖含量分别是忍冬花蕾及野生忍冬花蕾的148.82%、529.05%。结果表明忍冬中的酚酸及黄酮类成分在花中的分布比茎叶中多,而糖类成分在茎叶中的分布较花中多;与野生忍冬花蕾相比,人工栽培的忍冬花蕾总酚酸、总黄酮及可溶性总糖等活性成分的含量均得到提高,可见忍冬的人工栽培可以明显提高忍冬药材的内在品质。3.采用滤纸片法测定了忍冬茎叶乙醇提取物的抑菌活性。结果表明:不同萃取部分在浓度为60mg·ml-1时对供试菌株表现出一定程度的抑菌活性。整体上来看,乙酸乙酯部分抑菌活性效果最好,对黄瓜枯萎病原菌及金黄色葡萄球菌均表现出强抑菌,对辣椒疫霉病原菌、黄瓜枯萎病原菌、金黄色葡萄球菌3种病原菌的最小抑菌浓度分别为20mg·ml-1,10mg·ml-1,15mg·ml-1。正丁醇部分抑菌效果仅次于乙酸乙酯部分,对黄瓜枯萎病原菌表现出强抑菌活性。水部分对草莓枯萎病原菌及青霉表现出微弱的抑制活性,对其他5种菌种表现中等抑制活性。氯仿部分对草莓枯萎病原菌无抑制活性,对青霉表现出微弱的抑制活性,对其余5种菌种表现中等抑制活性。石油醚部分活性最弱,对辣椒疫霉病原菌及青霉无抑制活性,对草莓枯萎病原菌及黄瓜枯萎病原菌有微弱抑制活性,对其余3种菌种有中等抑制活性。4.利用柱层析、薄层制备及重结晶等分离纯化技术从忍冬茎叶乙醇提取物中分离得到了6个化合物,经纯度检测表明均为单一化合物。利用现代波谱技术（IR,EI-MS,1HNMR,13CNMR,DEPT）对化合物结构进行解析,确定了其中4个化合物结构:化合物H2为β-谷甾醇、化合物H4为β-胡萝卜苷、化合物H5为咖啡酸乙酯、化合物H6为绿原酸。其中化合物H5咖啡酸乙酯为首次从本属植物中发现。本文对忍冬茎叶化学成分进行了系统预试,测定了忍冬茎叶活性成分总酚酸、总黄酮及可溶性糖含量,初步明确了忍冬茎叶的化学成分分布特征;通过对忍冬茎叶乙醇提取物的不同萃取部分的抑菌活性研究,初步明确了忍冬茎叶抑菌活性特征;从忍冬茎叶乙醇提取物中分离得到6个化合物,丰富了忍冬茎叶化学成分的研究内容,也为进一步认识和合理开发忍冬植物资源提供了一定的理论依据。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1.1 忍冬属植物资源分布概况
• 1.2 忍冬属植物化学成分研究进展
• 1.2.1 酚酸类
• 1.2.2 苷类
• 1.2.3 黄酮类
• 1.2.4 挥发油类
• 1.2.5 其他类成分
• 1.3 忍冬属植物药理活性研究
• 1.3.1 抗炎解热
• 1.3.2 抑菌杀毒
• 1.3.3 保肝利胆
• 1.3.4 止血、降血脂
• 1.3.5 抗氧化及免疫调节
• 1.4 金银花质量调控的研究
• 1.4.1 金银花质量控制及分析技术
• 1.4.2 通过栽培管理措施进行调控
• 1.4.3 通过采收加工进行调控
• 1.5 本研究目的及设计思路
• 第二章 忍冬茎叶化学成分系统预试
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 仪器及试剂
• 2.1.3 化学成分系统预试
• 2.2 结果与分析
• 2.3 讨论
• 第三章 忍冬茎叶有效成分含量测定
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 仪器及试剂
• 3.1.3 忍冬茎叶有效成分含量测定
• 3.2 结果与分析
• 3.3 讨论
• 第四章 忍冬茎叶提取物抑菌活性研究
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 仪器及试剂
• 4.1.3 样品液的制备
• 4.1.4 PDA 培养基的制备
• 4.1.5 滤纸片法测定抑菌活性
• 4.2 结果与分析
• 4.2.1 忍冬茎叶乙醇提取物不同萃取部分抑菌效果
• 4.2.2 忍冬茎叶乙醇提取物乙酸乙酯部分不同浓度抑菌效果
• 4.3 讨论
• 第五章 忍冬茎叶化学成分研究
• 5.1 材料与方法
• 5.1.1 材料
• 5.1.2 仪器及试剂
• 5.1.3 提取与粗分
• 5.1.4 化合物的分离纯化
• 5.1.5 各化合物的纯度检测
• 5.1.6 各化合物的熔点测定和光谱测定
• 5.2 结果与分析
• 5.2.1 分离纯化结果
• 5.2.2 纯度检测结果
• 5.2.3 化合物结构鉴定与波谱数据
• 5.3 讨论
• 第六章 结论
• 参考文献
• 附图
• 致谢
• 作者简介