半枝莲抗肿瘤成分提取分离及含量测定

论文摘要

半枝莲Barbed Skullcap Herb为唇形科黄芩属植物半枝莲Scutellaria barbata D.Don的干燥全草。常用于抗菌、利尿消炎、抗病毒以及抗肿瘤。民间多单用或与其他药材组方,治疗消化道癌症、肝癌、绒毛粘膜上皮癌、乳腺癌肺癌、肝硬化和其他疾病。目前,文献对半枝莲的抗肿瘤活性物质基础研究报道仍然不全面。对半枝莲的质量控制也主要是通过检测药材中野黄芩苷或是总黄酮成分的含量,而单用一种成分或者组分作为质控指标,并不能全面反映该药材质量。这些因素影响了半枝莲药材的开发利用。鉴于此,本文深入地研究了半枝莲的化学成分及抗肿瘤活性物质基础,建立了能全面评价半枝莲药材质量的含量测定、指纹图谱方法。主要内容如下:1、半枝莲成分的初步提取分离和体外抗癌活性筛选。用75%乙醇制备半枝莲总提物,再用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇依次萃取,浓缩获得四个萃取部位的浸膏。用体外人肿瘤细胞筛选其抗肿瘤活性,为活性成分跟踪提供依据。2、用气相色谱-质谱法（GC-MS）和液相色谱-质谱法（LC-MS）分析三个萃取部位中的成分。GC-MS鉴定出石油醚部位的17个成分;LC-MS分别鉴定了二氯甲烷部位和乙酸乙酯部位的51个成分和15个成分,总结了这些成分的质谱裂解规律。3、对抗肿瘤活性部位二氯甲烷和乙酸乙酯部位进行植物化学分离,成功分离得到9个化合物,利用UV、IR、MS、NMR鉴定了其中8个化合物的结构,另1个化合物结构待定。并研究了其中的7个化合物（芹菜素-5-O-吡喃葡萄糖苷、野黄芩苷、反式桂皮酸、芹菜素、4′-羟基汉黄芩素、黄芩素、木犀草素）对8种人肿瘤细胞的体外抗癌活性,这是首次对半枝莲抗肿瘤活性成分进行较全面的抗癌活性筛选。4、建立半枝莲中主要抗癌活性成分的含量测定方法,为其质量控制提供手段。实验中发现,上述7个化合物均具有抗癌活性成分,其中6个成分在药材中含量较高,本文用HPLC-UV建立了同时测定7个化合物含量的方法,并成功的将其应用到了半枝莲药材活性成分含量分析中。5、尝试开展了半枝莲HPLC-UV指纹图谱的研究工作。结果显示,10批不同产地的半枝莲药材HPLC-UV谱图中,共有26个共有峰,利用指纹图谱相似度计算软件（2004A）计算得到的相似度>0.8。表明该法能全面的反映出半枝莲药材质量的一致性。

论文目录

• 英文缩略语表
• 中文摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 1. 概述
• 1.1 半枝莲化学成分研究
• 1.2 半枝莲的抗肿瘤作用研究
• 1.3 小结
• 2. 本文主要研究内容
• 第二章 半枝莲的初步提取分离和活性筛选
• 1. 半枝莲成分的提取和部位的分离
• 1.1 试剂和材料
• 1.2 成分的提取
• 1.3 初步分离
• 2. 各部位抗肿瘤活性的研究
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 2.3 结果
• 2.4 讨论
• 第三章 半枝莲提取物的质谱分析
• 1.G C-MS 法鉴定半枝莲石油醚提取物的化学成分
• 1.1 仪器、试剂与材料
• 1.2 气相色谱条件
• 1.3 质谱条件
• 1.4 数据处理及质谱检索
• 1.5 鉴定结果
• 1.6 小结
• 2.L C-MS 法分析半枝莲二氯甲烷部位和乙酸乙酯部位的化学成分
• 2.1 仪器、试剂和材料
• 2.2 方法
• 2.3 鉴定结果
• 3. 小结
• 第四章 半枝莲化学成分分离和鉴定
• 1. 半枝莲化学成分的分离
• 1.1 仪器、试剂和材料
• 1.2 分离方法
• 2. 化合物的鉴定
• 3. 小结
• 第五章 主要成分的抗肿瘤活性研究
• 1. 试验条件
• 1.1 仪器、试剂和材料
• 1.2 主要试剂配制
• 2. 实验方法
• 2.1 细胞培养
• 2.2 细胞传代
• 2.3 收集细胞
• 3. 半枝莲化合物对几种细胞株MTT 抑瘤实验
• 3.1 种板和给药
• 3.2 MTT 法测定半枝莲7 个化合物对8 种细胞的抑制率
• 4. 小结
• 第六章 主要成分的含量测定
• 1. 实验条件
• 1.1 试剂
• 1.2 仪器
• 1.3 样品
• 2. 半枝莲供试溶液的制备
• 3. 色谱条件优化
• 3.1 色谱柱的选择
• 3.2 流动相的选择
• 3.3 检测波长的选择
• 3.4 柱温的选择
• 4. 对照品溶液的配制
• 5. 方法学考察
• 5.1 线性关系考察
• 5.2 精密度实验
• 5.3 稳定性实验
• 5.4 重现性实验
• 5.5 加样回收率测定
• 6. 样品中7 个成分含量的测定
• 7. 讨论
• 第七章 半枝莲指纹图谱的建立
• 1. 实验条件
• 2. 色谱条件
• 3. 供试品溶液制备
• 4. 方法学考察
• 4.1 精密度试验
• 4.2 重现性试验
• 4.3 稳定性试验
• 5. 指纹图谱软件
• 6. 指纹图谱的建立
• 7. 半枝莲药材的指纹图谱相似性评价
• 8. 讨论
• 第八章 总结和展望
• 1. 总结
• 2. 展望
• 参考文献
• 致谢
• 综述
• 参考文献
• 附图