内皮特异性分子-1在慢性阻塞性肺疾病中的变化和可能的作用

论文摘要

目的探讨经腹腔注射香烟提取物（cigarette smoke extract, CSE）建立肺气肿小鼠模型,并评价模型的病理改变,肺功能,细胞凋亡,蛋白酶表达,抗氧化能力。方法21只SPF级BALB/C小鼠随机分为PBS组（n=7）和CSE组（n=14）,制备香烟提取物。两组分别在0,11,22天经腹腔注射0.3mlPBS或CSE,第28天处理两组小鼠,收集标本。PLY3211小动物肺功能检测系统进行小鼠肺功能检查；采用静脉留置针行灌洗术留取支气管肺泡灌洗液（BALF）,并用终点比色法检测BALF总抗氧化能力（T-AOC）;肺组织病理切片苏木素-伊红（HE）染色后观察形态学改变并定量测定肺泡平均截距（MLI）,肺泡破坏指数（DI）和平均肺泡隔厚度（MAST）;末端转移酶标记技术（TUNEL法）测定肺组织细胞凋亡指数（AI）；免疫组织化学法测定肺组织MMP-2和MMP-9表达。结果（1）与PBS组比较,CSE组小鼠动态肺顺应性减低（p<0.05）,气道阻力升高（p<0.05）。（2）病理学观察示：CSE组小鼠肺组织肺泡腔扩大、部分肺泡间隔断裂、肺气肿形成,气道上皮排列紊乱、部分气道上皮增生、周围炎症细胞浸润并伴有平滑肌增生。部分小血管管腔狭窄,甚至闭锁,血管壁增厚,平滑肌增殖。病理形态学定量分析显示：与PBS组比较,CSE组小鼠肺泡平均截距及肺泡破坏指数增高（均p<0.05）,、平均肺泡隔厚度减少（p<0.05）。（3）与PBS组比较,CSE组小鼠肺组织细胞凋亡率升高（p<0.05）。（4）与PBS组比较,CSE组小鼠肺组织MMP-2及MMP-9表达增高（p<0.05）。（5）与PBS组比较,CSE组小鼠支气管肺泡灌洗液抗氧化能力减低（p<0.05）。结论经腹腔注射CSE可以建立肺气肿小鼠模型,该模型稳定可靠,与人类慢性阻塞性肺疾病高度相似。目的探讨内皮特异性分子-1（Endothelial cell specific molecule-1, ESM-1）在经腹腔注射香烟提取物所致慢性阻塞性肺疾病小鼠中的变化情况,了解其与肺组织结构细胞凋亡的相关性。方法21只6周雄性SPF级BALB/C小鼠随机分为2组：PBS组,CSE组。PBS组7只,CSE组14只。分别在0,11,22天经腹腔注射PBS/CSE,第28天处死小鼠。留取肺组织,冻存在—86℃冰箱中,提取组织蛋白,采用Western Blotting法检测肺组织ESM-1的表达。肺组织包埋切片,用免疫组织化学法检测肺组织ESM—1原位表达情况。用ELISA法测定小鼠血清ESM-1浓度。结果（1）与PBS组比较,CSE组小鼠肺组织ESM-1表达（Western Blotting）降低（p<0.05）。（2）与PBS组比较,CSE组小鼠肺组织ESM-1表达（免疫组织化学法）降低（p<0.05）。（3）与PBS组比较,CSE组小鼠血清ESM-1浓度降低（p<0.05）。（4）肺组织细胞凋亡指数（AI）与肺组织ESM-1表达（Western Blotting法） （r=-0.998,p<0.001）呈负相关,与血清ESM-1浓度呈负相关（r=-0.774,p<0.05）。结论本研究证明了肺气肿小鼠肺组织ESM-1的表达以及血清浓度降低,且与AI呈负相关。ESM-1可能参与了COPD细胞凋亡/修复失衡机制。目的探讨内皮特异性分子-1（Endothelial cell specific molecule-1, ESM-1）在慢性阻塞性肺疾病（Chronic obstructive pulmonary disease, COPD）患者体内的变化情况,了解其与肺组织结构细胞凋亡及肺功能的相关性。方法收集COPD患者及正常人的肺组织、血清。肺组织分组：A组：非吸烟（?）COPD者；B组：吸烟并COPD组（稳定期轻度）；C组：吸烟并COPD患者（稳定期中度）。血清分组：D组：健康不吸烟者；E组：吸烟并COPD组（稳定期中度）；F组：吸烟并COPD患者（稳定期重度）；G组：吸烟并COPD患者（稳定期极重度）。肺组织病理切片苏木素-伊红（HE）染色后观察形态学改变并定量测定肺泡平均截距（MLI）,肺泡破坏指数（DI）和平均肺泡隔厚度（MAST）;末端转移酶标记技术（TUNEL法）测定肺组织细胞凋亡指数（AI）；免疫组织化学法检测肺组织ESM-1原位表达情况。ELISA法测定人血清ESM-1浓度。结果（1）病理学观察示：B组及C组人肺组织肺泡腔扩大、部分肺泡间隔断裂、肺气肿形成,气道上皮排列紊乱、部分气道上皮增生周围炎症细胞浸润并伴有平滑肌增生。部分小血管管腔狭窄,甚至闭锁,血管壁增厚,平滑肌增殖。病理形态学定量分析显示：B组及C组MLI较A组明显增高,差异有统计学意义（p<0.05）。C组MLI较B组明显增高,差异有统计学意义（p<0.05）。B组及C组DI较A组明显增高,差异有统计学意义（p<0.05）。C组DI较B组明显增高,差异有统计学意义（p<0.05）。B组及C组MAST较A组明显降低,差异有统计学意义（p<0.05）。C组MAST较B组明显降低,差异有统计学意义（p<0.05）。（2）B组及C组凋亡细胞指数（AI）较A组明显增高,差异有统计学意义（p<0.05）。C组AI较B组明显增高,差异有统计学意义（p<0.05）。（3）B组及C组ESM-1蛋白表达较A组明显降低,差异有统计学意义（p<0.05）。C组ESM-1蛋白表达较B组明显降低,差异有统计学意义（p<0.05）（4）E组、F组、G组血清ESM-1浓度较D组明显降低,差异有统计学意义（p<0.05）。F组、G组血清ESM-1浓度较E组明显降低,差异有统计学意义（p<0.05）。G组血清ESM-1浓度较F组明显降低,差异有统计学意义（p<0.05）（5）肺组织细胞凋亡指数（AI）与肺组织ESM-1表达（r--0.886,p<0.001）呈负相关结论本研究证明了COPD患者肺组织ESM-1的表达以及血清浓度降低,且与AI呈负相关,且与肺功能相关。ESM-1可能参与了COPD细胞凋亡/修复失衡机制。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 目录
• 缩写词简表
• 第一章 肺气肿小鼠模型的建立与评价
• 1.1 前言
• 1.2 材料与方法
• 1.2.1 材料与主要试剂
• 1.2.2 方法
• 1.2.3 统计学分析
• 1.3 结果
• 1.3.1 小鼠一般情况观察
• 1.3.2 小鼠肺功能的检测
• 1.3.3 小鼠肺组织病理学改变及形态定量分析
• 1.3.4 小鼠肺泡灌洗液总抗氧化能力变化
• 1.3.5 肺组织细胞原位凋亡
• 1.3.6 小鼠肺组织MMP-2表达
• 1.3.7 小鼠肺组织MMP-9表达
• 1.4 讨论
• 1.5 结论
• 第二章 肺气肿小鼠模型中内皮特异性分子-1的变化情况及其与肺组织结构细胞凋亡的相关性分析
• 2.1 前言
• 2.2 材料与方法
• 2.2.1 材料与主要试剂
• 2.2.2 方法
• 2.2.3 统计学分析
• 2.3 结果
• 2.3.1 小鼠肺组织ESM-1测定（Western Blotting法）
• 2.3.2 小鼠肺组织ESM-1测定（免疫组织化学法）
• 2.3.3 小鼠血清ESM-1测定
• 2.3.4 小鼠肺组织结构细胞凋亡指数与ESM-1表达的相关性分析
• 2.4 讨论
• 2.5 结论
• 第三章 慢性阻塞性肺疾病患者体内内皮特异性分子-1的变化情况及其与肺组织结构细胞凋亡的相关性分析
• 3.1 前言
• 3.2 材料与方法
• 3.2.1 材料与主要试剂
• 3.2.2 方法
• 3.2.3 统计学分析
• 3.3 结果
• 3.3.1 人肺组织病理学改变及形态定量分析
• 3.3.2 人肺组织原位细胞凋亡
• 3.3.3 人肺组织ESM-1表达
• 3.3.4 人血清ESM-1浓度
• 3.3.5 人肺组织结构细胞凋亡指数与ESM-1表达的相关性分析
• 3.4 讨论
• 3.5 结论
• 参考文献
• 第一章
• 第二章
• 第三章
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读硕士学位期间撰写的论文与所获奖励