苹果SSR标记体系的优化及遗传连锁图谱构建初探

论文摘要

苹果作为世界主要栽培果树之一,已有几千年的栽培历史。其遗传背景复杂、杂和度高、生命周期长、童期长、自交亲和性差、杂交繁殖模式复杂等诸多问题给遗传育种研究带来了很大障碍。传统遗传育种方法的局限性使苹果育种进程缓慢,随着苹果分子生物学研究的不断深入和发展,分子生物学手段为苹果的遗传研究和育种工作提供了有利工具。富士和秦冠品种的综合性状优良,不仅在我国现有栽培品种中占有重要地位,同时也是十分重要的杂交育种亲本材料。1. SSR标记体系优化以秦冠×富士F1群体的158个单株为试验材料,对苹果SSR标记PCR反应体系中各个成分进行优化,得到最佳的PCR反应体系:在20μL总的反应体系Taq DNA聚合酶0.5 U、引物0.1μmol /L、Mg2+ 1.8 mmol/L、模板DNA浓度15 ng/μL、dNTPs 0.30 mmol /L。2.引物筛选利用双亲筛选法,从340对SSR引物中筛选出49对具有多态性的引物。3.遗传图谱构建利用筛选出的具有多态信息的SSR引物,对秦冠×富士F1群体的158个株系进行PCR扩增,将F1各个体的带型按照cp模式分别统计,利用Join-Map 3.0软件构建苹果遗传图谱。在群体中共获得75个SSR标记,其中17个不符合孟德尔遗传,其中27个位点可定位到10个连锁群上。用优化后的体系获得的SSR标记在连锁群上的定位与框架图谱一致,说明本研究获得方法体系可获得稳定准确的标记并构建遗传连锁图。4.抗早期落叶病基因定位“秦冠×富士”杂交F1代158株群体出现抗病、感病两种表现型,抗病和感病单株数分别为84和74株,经卡方检验,分离比例符合1:1的比例。最终将抗落叶早期病的基因定位在遗传图谱中的第10个连锁群上。与已经发表的苹果遗传连锁框架图对比结果表明:抗早期落叶病基因被定位在已发表图谱的第8连锁群上。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1.1 DNA 分子标记
• 1.1.1 常用的分子标记
• 1.1.2 SSR 标记
• 1.2 构建遗传图谱的理论基础和方法
• 1.2.1 构建遗传图谱的理论基础
• 1.2.2 构建果树遗传连锁图的方法
• 1.3 SSR 标记在果树研究中的应用
• 1.3.1 果树亲缘关系鉴定的研究
• 1.3.2 遗传连锁图谱的构建及基因定位
• 1.4 苹果的遗传连锁图谱构建的研究进展
• 1.5 苹果早期落叶病
• 1.5.1 发病规律
• 1.5.2 抗病性鉴定方法
• 1.6 本实验的目的与意义
• 第二章 试验材料与方法
• 2.1 试材、试剂与仪器
• 2.1.1 试材
• 2.1.2 试剂
• 2.1.3 实验仪器
• 2.1.4 常用储备液和缓冲液
• 2.2 SSR 分析
• 2.2.1 苹果总DNA 的提取
• 2.2.2 DNA 完整性、浓度及纯度的检测
• 2.2.3 SSR 引物合成和筛选
• 2.2.4 SSR 体系优化
• 2.2.5 PCR 扩增产物检测
• 2.3 遗传图谱构建
• 2.4 数据统计及遗传作图
• 2.5 苹果早期落叶病田间调查
• 2.5.1 苹果早期落叶病分级标准
• 2.5.2 苹果早期落叶病田间调查方法
• 第三章 实验结果
• 3.1 苹果DNA 的提取结果
• 3.2 苹果SSR 标记体系的构建
• 2+浓度对SSR 反应的影响'>3.2.1 Mg²⁺浓度对SSR 反应的影响
• 3.2.2 模板DNA 浓度对SSR 反应的影响
• 3.2.3 不同引物浓度对SSR 反应的影响
• 3.2.4 dNTPs 浓度对SSR 反应的影响
• 3.2.5 酶用量对SSR 反应的影响
• 3.2.6 引物筛选结果
• 3.3 苹果（秦冠×富士）杂交F1 代早期落叶病的抗性遗传分析
• 3.4 苹果SSR 标记遗传图谱构建及抗早期落叶病基因的定位
• 第四章 讨论
• 4.1 SSR 标记在苹果育种中的应用
• 4.2 苹果遗传图谱的构建及抗早期落叶病基因定位
• 4.3 苹果早期落叶病抗性遗传分析
• 第五章 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 作者简介