论文摘要
目的：探讨细胞外基质蛋白Mindin在小鼠大肠癌发生发展中的生物学功能及其相关的信号通路。方法：本研究通过构建Mindin基因的表达质粒和Mindin-SiRNA表达载体，稳定转染小鼠大肠癌细胞系CMT93，利用G418和嘌呤霉素筛选出干扰质粒或者过表达的稳定细胞株；利用半定量RT-PCR、Western-blot等方法检测Mindin基因在mRNA和蛋白水平的表达变化情况。通过Transwell小室、MTT等技术方法分别探讨Mindin在CMT93细胞中对其迁移、侵袭和增殖方面的变化情况。同时构建动物模型，把干扰或过表达Mindin后的CMT93细胞注射在C57BL/6小鼠皮下，观察其成瘤的生长情况。结果：成功构建了Mindin的表达质粒和干扰质粒；用RT-PCR和Western-blot方法验证了Mindin干扰和过表达的细胞株中基因表达效果有差异，并具有显著性的意义；Transwell小室和MTT法等实验发现大肠癌细胞CMT93在干扰Mindin后，细胞的迁移和侵袭能力增强，增殖能力提高，而在Mindin过表达的细胞株中结果则相反，均表现为下降的趋势。在体内实验中，我们观察小鼠皮下成瘤的生长情况显示，注射干扰Mindin细胞的瘤体较对照组更大，而注射过表达的细胞后瘤体更小。同时，我们发现与对照组相比，干扰Mindin的细胞株中ERK1/2的磷酸化水平升高，反之，过表达者磷酸化水平则下降。结论：Mindin在体内外对小鼠大肠癌细胞CMT93的迁移、侵袭和增殖能力有抑制作用，同时MAPK/Erk1/2信号通路可能参与其中。