论文摘要
咀嚼肌紊乱疾病是颞下颌关节紊乱病（temporomandibular disorders TMD）中的一个重要分类，后者是一种涉及多种病理改变的常见病、多发病。它的病理学改变可以包括咀嚼肌肉和颞下颌关节，根据其临床表现，通常可分为咀嚼肌紊乱疾病，关节结构紊乱疾病，关节炎症性疾病和骨关节病；它的病因学研究发现，颞下颌关节病变与生理因素和社会心理因素相关。随着TMD双轴理论的提出，TMD属于身心疾病这一概念已被广大学者和临床工作者接受。更有学者认为，心理因素是造成颞下颌关节功能紊乱的主要原因。一般情况下，应激会导致两种心理状态的改变，焦虑与抑郁。严重的抑郁可导致产生躯体化症状。多年流行病调研发现，抑郁与TMD的发生存在相关性，而这其中以咀嚼肌紊乱症状发生者居多。研究表明，有咀嚼肌紊乱症状的患者，不仅其抑郁水平要明显高于正常人群，其症状严重程度与抑郁水平也成显著正相关；另有学者也认为，对于TMD这个整体概念来说，相对于关节或关节盘，肌肉功能紊乱与精神心理因素更具有相关性。从另一方面来看，TMD患者反映出的异常情绪，例如抑郁、消沉、焦躁等可以为临床医生提供一种生物-心理-社会学方面的重要信息，针对不同症状，消除患者的社会心理刺激，给予必要的心理治疗是提高治疗效果，减少复发的有效措施。有研究发现，给予TMD患者辅助的心理干预治疗可以有效提高治疗效果，并且减少疾病复发。虽然有大量文献支持抑郁与TMD，特别是咀嚼肌紊乱疾病存在相关性这一观点，但目前的研究基本都属于流行病学调查的范围，且大部分为对照性的横断面研究，对于心理因素所致的抑郁是否能够直接导致咀嚼肌的器质性变化乃至功能紊乱，是否有方法拮抗抑郁对咀嚼肌的影响等诸多问题仍缺少直接证据。基于以上原因，本课题着重研究了心理应激导致的抑郁样行为大鼠咬肌深、浅层的超微结构及代谢改变，以及近年来以抗抑郁作用成为研究热点的传统中药姜黄素对其的影响。另外，我们在实验中加入大鼠小腿腓肠肌作为咀嚼肌和躯体骨骼肌的对比，探讨抑郁对咬肌的影响是否具有特异性。本课题共分四个部分，具体内容如下：1、建立大鼠慢性不可预知性轻度应激模型以及模型评价。建立慢性不可预知性轻度应激（Chronic Unpredictable Mild Stress CUMS）大鼠模型。模型选用7种柔和的应激因子，以随机方式每日对大鼠施加1次，造成大鼠抑郁样行为改变。采用柔和应激因子可避免对大鼠躯体产生刺激，而采用随机的方式可避免大鼠在长期应激过程中对应激因子产生适应性而导致的模型效度降低。在建模的同时设立高、中、低浓度姜黄素拮抗组与氟西汀药物对照组，以检验这两种具有抗抑郁作用的药物对模型动物的影响。建模过程中发现，CUMS可以对大鼠的体重增长量以及糖水偏爱度产生影响，应激组大鼠体重增长量明显低于对照组组，且糖水偏爱度下降；旷场实验的结果显示，应激大鼠在旷场中心停留时间上升、总移动速率及移动距离下降；血清ELISA检验显示应激大鼠的血清皮质醇及促肾上腺皮质激素浓度升高。体重、摄糖、行为学及血清ELISA检测结果综合表明模型大鼠产生了抑郁样行为改变，而这种改变可以被姜黄素剂量依赖性的逆转，传统抗抑郁药物氟西汀也可改善大鼠的这种抑郁样状态。2、慢性不可预知性轻度应激对大鼠咬肌超微结构的影响及姜黄素的拮抗作用；在这部分实验中，我们制作了对照组、应激组、高、中、低浓度姜黄素组及氟西汀组，共6组大鼠的深、浅层咬肌及腓肠肌透射电镜样本，以观测各个肌肉的超微结构改变。观察结果显示应激大鼠的超微结构改变主要发生在线粒体及部分内质网，咬肌及腓肠肌的线粒体可发生严重空泡性病变、内质网扩张；而高浓度姜黄素显示出了良好的线粒体保护作用。3、慢性不可预知性轻度应激大鼠咬肌自由基代谢的变化以及姜黄素的拮抗作用。在这部分实验中，我们测试了大鼠咬肌及腓肠肌的SOD、CAT、GSH-Px活力，MDA含量，Mn-SOD mRNA表达，HSP70、HSF1的mRNA和蛋白表达。结果显示，应激大鼠咬肌及腓肠肌中的SOD、CAT、GSH-Px酶活力明显降低，MDA含量上升，Mn-SOD mRNA表达下降，HSP70、HSF1的mRNA和蛋白表达上升。这样的结果提示咬肌处于氧化应激损伤状态。姜黄素可以在一定程度上剂量依赖性地逆转上述现象，提示姜黄素具有改善机体氧化应激水平、维持内环境稳定的作用。咬肌深、浅层与腓肠肌对应激以及抗抑郁药物的反应具有一致性，提示应激对口颌面部骨骼肌及四肢骨骼肌的自由基代谢影响并无部位差异。4、慢性不可预知性轻度应激大鼠咬肌能量代谢的变化以及姜黄素的拮抗作用。在这部分实验中，我们测试了大鼠咬肌及腓肠肌的Na+-K+ATP酶、Ca2+-Mg2+ATP酶、LDH酶活力，LD含量，AMPK、PPAR及UCP3的mRNA及蛋白表达。结果显示，应激大鼠咬肌及腓肠肌中的Na+-K+ATP酶、Ca2+-Mg2+ATP酶活力明显降低，LDH活力升高，LD含量上升， AMPK、PPAR及UCP3的mRNA和蛋白表达下降，提示咬肌出现了能量代谢异常的状态。姜黄素可以在一定程度上剂量依赖性地逆转上述现象，提示姜黄素具有改善机体能量异常代谢、保护肌细胞的作用。同样，咬肌深、浅层与腓肠肌对应激以及抗抑郁药物的反应具有一致性，提示应激对口颌面部骨骼肌及四肢骨骼肌的能量代谢影响也无部位特异性。本课题的创新点：1、本实验利用慢性不可预知性轻度应激（CUMS）建立大鼠抑郁模型，并证实长期心理应激导致的抑郁状态可导致大鼠咬肌超微结构改变及代谢紊乱；2、研究证实在应激的同时加入抗抑郁药物姜黄素，可以对抗应激的影响，对大鼠咬肌具有一定保护作用，为今后研究应激对抗药物提供了实验依据；3、据文献报道，大鼠咬肌深、浅层在功能上存在差异，我们在实验中，分别取咬肌浅层及深层进行对照研究；另外，我们加入腓肠肌作为四肢骨骼肌与咬肌进行对比，研究慢性心理应激对咀嚼肌和躯体骨骼肌的影响是否存在差异。结果发现慢性心理应激对咀嚼肌和躯体骨骼肌的影响在超微结构、自由基代谢和能量代谢水平不存在差异性。