论文题目: 胸腺五肽固相合成的工艺优化与放大
论文类型: 硕士论文
论文专业: 生物化工
作者: 宋明媚
导师: 沈树宝
关键词: 固相合成,胸腺五肽,优化与放大
文献来源: 南京工业大学
发表年度: 2005
论文摘要: 以H-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-OH 为序列的胸腺五肽(TP5)是胸腺生成素II(Thymopoietin II)中第32~36 位的氨基酸残基片段,它保留了胸腺生成素II原有的生物活性,对机体的免疫系统具有双向调节作用,现已作为药物投放市场。因此,本文采用固相法合成胸腺五肽,不仅具有很好的市场前景,而且可为建立多肽固相合成技术平台提供一定的理论支持。本文首先综述了一般肽类固相合成的方法和TP5 的合成策略、现有水平及存在的问题,针对性地研究了固相合成TP5 方法中的几个关键影响因素:(1)树脂的溶胀条件(2)第一个氨基酸与树脂的连接反应(3)第一步连接反应中树脂上氨基酸的光学纯度和含量分析(4)肽链延长过程中所使用的缩合试剂(5)产物的切割条件,最终建立了较为高效、廉价的TP5 合成工艺路线,并证明了优化的工艺路线用于大规模合成的可行性。总结和归纳全文工作,结论如下: 1. 通过比较树脂担载量的大小和不同溶胀试剂对树脂溶胀度的影响,发现当树脂的担载量增大或溶剂极性增大时,树脂的溶胀性反而减小。2. 第一个氨基酸与树脂连接反应是整个合成过程中最关键的反应,它的好坏直接关系到最终产品的产率和纯度。本文通过添加复合缩合剂、改变溶剂的极性及采用不同种类的树脂,将第一步氨基酸的连接率从原先的30%~40%提高到100%;同时从理论上详细论述了复合缩合剂和溶剂对反应过程的影响,并提出了加入催化剂的碳二亚胺(DCC 或DIC)法和2,6-二氯苯甲酰氯(DCB)法的可能的反应机理。3. 第一步连接反应带来的一些副产物(D 型酪氨酸和酪氨酸-酪氨酸二肽)对最终产品的纯度和活性有很大的影响。通过建立副产物含量的液相分析方法,直观地比较和量化了不同的反应条件对氨基酸光学纯度和氨基酸含量的影响。4. 在肽链延长过程中,分别采用N,N’-二环己基碳二亚胺(DCC)、N,N’-二异丙基碳二亚胺(DIC)、氟磷酸-O-苯并三唑-N,N,N’,N’-四甲基脲(HBTU)和六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(PyBOP)四种缩合试剂合成TP5,实验证明:DIC 法在产率和纯度方面均能达到良好的水平。
论文目录:
摘要
ABSTRACT
第一章 绪言
1.1 多肽概念
1.1.1 肽和肽的分类
1.1.2 肽键的结构
1.1.3 胸腺五肽的研究进展
1.2 多肽合成
1.2.1 多肽合成简史
1.2.2 多肽固相合成的原理
1.2.3 多肽合成中的固相载体
1.2.4 固相合成多肽的步骤及方法比较
1.3 本论文的意义及主要内容
第二章 胸腺五肽固相合成的合成工艺
2.1 胸腺五肽的合成
2.1.1 实验仪器及试剂
2.1.2 胸腺五肽-树脂复合物的合成
2.1.3 检测树脂上的氨基酸数量
2.1.4 茚三酮显色法
2.2 胸腺五肽-树脂复合物的切割
2.2.1 实验仪器及试剂
2.2.2 多肽-树脂复合物的切割
2.3 胸腺五肽纯度分析
2.3.1 实验仪器与试剂
2.3.2 高效液相色谱分析
2.4 实验结果
2.5 本章小结
第三章 酪氨酸与树脂连接反应的优化
3.1 N, N’-二环己基碳二亚胺法
3.1.1 反应机理
3.1.2 实验仪器及试剂
3.1.3 实验方法
3.1.4 溶剂和N-羟基苯并三氮唑对连接率的影响
3.1.5 反应物比例的优化
3.2 N, N’-二异丙基碳二亚胺法
3.2.1 反应机理
3.2.2 实验仪器及试剂
3.2.3 实验方法
3.2.4 溶剂对连接率的影响
3.2.5 碱对连接率的影响
3.2.6 反应物比例的优化
3.3 2,6-二氯苯甲酰氯法
3.3.1 反应机理
3.3.2 实验仪器及试剂
3.3.3 实验方法
3.3.4 溶剂对连接率的影响
3.3.5 时间对连接率的影响
3.4 酪氨酸与2-氯三苯甲基氯树脂的连接反应
3.4.1 原理
3.4.2 实验仪器及试剂
3.4.3 实验方法
3.4.4 反应物比例对连接率的影响
3.5 本章小结
第四章 树脂上酪氨酸光学纯度和酪氨酸含量的分析
4.1 第一步连接反应对酪氨酸光学纯度的影响
4.1.1 原理
4.1.2 实验仪器及试剂
4.1.3 实验方法
4.1.4 实验结果
4.2 第一步连接反应对酪氨酸纯度的影响
4.2.1 原理
4.2.2 实验仪器及试剂
4.2.3 实验方法
4.2.4 实验结果
4.3 本章小结
第五章 合成工艺中其他关键步骤的优化
5.1 树脂溶胀
5.1.1 实验材料
5.1.2 实验方法
5.1.3 实验结果
5.2 延长肽链的过程中缩合试剂的优选
5.2.1 实验仪器及试剂
5.2.2 实验方法
5.2.3 实验分析及计算结果
5.3 切割条件的优化
5.3.1 实验仪器及试剂
5.3.2 实验方法
5.3.3 实验结果
5.4 本章小结
第六章 优化的胸腺五肽合成工艺以及合成规模的初步放大
6.1 优化的胸腺五肽合成工艺与实验结果
6.1.1 王树脂合成胸腺五肽
6.1.2 氯树脂合成胸腺五肽
6.1.3 成本的比较
6.2 合成规模的初步放大
6.2.1 实验方法和反应器
6.2.2 实验结果
6.2.3 成本的比较
6.3 本章小结
第七章 结论与展望
7.1 结论
7.2 展望
参考文献
附录
硕士论文期间所获成果
致谢
发布时间: 2005-10-13
参考文献
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- [4].胸腺五肽肽库及微波合成伐普肽的研究[D]. 邱芊.南京工业大学2005
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- [6].胸腺五肽干粉吸入剂的研究[D]. 李晗.中国人民解放军军事医学科学院2014
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- [9].新型聚乳酸—聚乙二醇水凝胶胸腺五肽药物缓释研究[D]. 张彦.复旦大学2010
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