论文摘要
[背景与目的]肠易激综合征（irritable bowel syndrome,IBS）是常见的功能性肠病,其发病机制尚不清楚。已提出的有胃肠动力异常,内脏敏感性改变,脑-肠相互作用、神经免疫内分泌失调等机制,但什么细胞及分子参与IBS的机制尚不清楚。细胞或器官功能的异常必然有其物质的基础,蛋白质是生命活动的基础,本研究应用蛋白质组学方法,寻找腹泻型IBS（IBS withdiarrhea,IBS-D）患者和正常人结肠黏膜的差异表达蛋白质,旨在筛选出对IBS-D发病起重要作用的蛋白质,揭示IBS-D的分子机制。[材料与方法]IBS-D患者5例,诊断均符合功能性胃肠病罗马Ⅲ科研诊断标准,健康志愿者5例为对照组。分别在进行结肠镜检查时,直视下于盲肠及乙状结肠粘膜各活检4块;3块立即置于含0.1%苯甲基磺酰氟的冰盐水中洗净,液氮中保存;1块于福尔马林溶液中固定,石蜡包埋。将两部位液氮标本等量混合,提取组织总蛋白后,进行双向凝胶电泳。采用银染法对凝胶进行显色固定,扫描仪获取图像。使用Image Master 2D Elite软件对图像进行分析,筛选出在IBS-D组表达有明显差异的蛋白质点;选取显示清晰的10个点进行质谱鉴定;应用Western blot和免疫组织化学方法对其中一种蛋白质进行验证。[结果]健康对照组2-DE图谱得到1504±69个蛋白点,IBS-D组显示1356±104个蛋白点,发现Volume值改变=2.0倍以上的点共41个,其中11个点表达上调,30个点表达下调。分别选择其中表达上调及下调明显的5个点,进行质谱鉴定,表达上调的蛋白经鉴定为线粒体ATP合酶d亚基、硫转移酶1A3/1A4、细胞质乙酰辅酶A乙酰基转移酶、硫氧还蛋白和醛脱氢酶2;表达下调的蛋白为免疫球蛋白kappa链（immunoglobulin kappa chain,Ig k）、异丁酰辅酶A脱氢酶、WDR1蛋白、T复合物蛋白1a亚单位和烯醇化酶a。应用Western blot方法对上述5例IBS-D患者和5例健康对照组的结肠黏膜的Ig k和Igλ进行检测,发现两组Ig k存在显著性差异,IBS-D组含量明显低于对照组（P＜0.05）;Igλ无显著性差异（P＞0.05）。对满足罗马Ⅲ科研标准的24例IBS-D患者和19例健康对照的盲肠和乙状结肠黏膜标本的Ig k和Igλ免疫组织化学染色显示,粘膜固有层浆细胞、腺泡间质、小血管壁及上皮基底膜表达Ig k和Igλ;两组Ig k存在显著性差异（P＜0.05）,IBS-D组表达减弱;Igλ差异不明显。[结论]IBS-D患者结肠粘膜存在一些蛋白质表达的上调与下调,这些蛋白包括线粒体ATP合酶d亚基、硫转移酶1A3/1A4、细胞质乙酰辅酶A乙酰基转移酶、硫氧还蛋白、醛脱氢酶2、Ig k、异丁酰辅酶A脱氢酶、WDR1蛋白、T复合物蛋白1a亚单位和烯醇化酶a。Ig k在结肠黏膜固有层浆细胞、腺泡间质、小血管壁及上皮基底膜表达,Western blot和免疫组织化学染色均显示Ig k在IBS-D组表达减弱。