聚乙二醇化重组人生长激素的免疫原性、生物活性及药代动力学研究

论文摘要

目的：分析单甲氧基聚乙二醇丙醛（mPEG-ALD，20kD）化重组人生长激素(PEG20kD-GH)的免疫原性及生物活性，并进行药代动力学研究。方法：用单聚PEG20kD-GH免疫家兔，检测血清中抗体滴度，与重组人生长激素（rhGH）比较免疫原性；利用未成年去垂体大鼠体重增加法检测单聚PEG20kD-GH的在体生物活性；建立双抗夹心ELISA法检测单聚PEG20kD-GH；家兔分别单次皮下注射单聚PEG20kD-GH、PEG20kD-GH、rhGH，比较三者的药代动力学差异；小鼠分别单次皮下注射高、中、低三个浓度单聚PEG20KD-GH，单次静脉注射中剂量单聚PEG20KD-GH，单次皮下注射中剂量rhGH，比较各组之间药代动力学的差异。结果：与rhGH、PEG5kD-GH相比，单聚PEG20KD-GH明显降低了抗体滴度，缩短了抗体持续时间，降低了免疫原性；在体活性测定表明单聚PEG20KD-GH的体内作用时间更长，其一次给药比每天给药的rhGH更有效：在家兔体内药动学中，sc单次单聚PEG20KD-GH，其t1／2β为19．40±2．07h，AUC为5269．13±433．65h·ng／ml，CL为0．07±0．01L／h，与rhGH组、PEG5kD-GH组相比均有显著差异（p＜0．05）；在小鼠体内药动学中，sc低、中、高PEG20KD-GH三剂量组，Cmax分别为910．15±77．7ng／ml、1916．54±117．1977．7ng／ml、2702．46±116．41ng／ml，t1／2β分别为18．29±3．29h、17．37±2．56h、16．21±0．64h，AUC分别为17013．6±2605．8h·ng／ml、35466．4±4218．4h·ng／ml、52261．1±6948．9h·ng／ml，比值约为1：2．3：3．4，与剂量比接近，单次ⅳ中剂量PEG20KD-GH，AUC为42261．5±3754．9h·ng／ml，CL为0．00048±3．85E-05L／h，t1／2β为14．61±0．62h，单次sc中剂量组rhGH，t1／2β为3．35±0．88h，CL为0．00536±0．00059L／h，AUC为3738．7±320．9h·ng／ml。结论：分析了单聚PEG20KD-GH的免疫原性及生物活性，并对其药代动力学进行研究，为研制具有长效作用的聚乙二醇化重组人生长激素提供了理论依据。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 一 前言
• 1 人生长激素
• 2 聚乙二醇
• 3 PEG修饰对蛋白质类药物的影响
• 4 PEG化蛋白类药物可能存在的问题及解决思路
• 5 PEG修饰蛋白质类药物的研究现状
• 6 PEG化人生长激素
• 7 本课题的内容及意义
• 二 实验材料与仪器
• 1 实验动物
• 2 药物与试剂
• 3 实验仪器
• 三 实验方法
• 1 聚乙二醇化重组人生长激素免疫原性分析
• 1.1 蛋白质免疫印迹分析
• 1.2 抗原抗体结合能力分析
• 1.3 诱生抗体能力检测
• 2 聚乙二醇化重组人生长激素生物活性分析
• 3 聚乙二醇化重组人生长激素药代动力学研究
• 3.1 ELISA检测法的建立及方法学验证
• 20kD-GH药代动力学分析'>3.2 家兔体内PEG_20kD-GH药代动力学分析
• 20kD-GH药代动力学分析'>3.3 小鼠体内PEG_20kD-GH药代动力学分析
• 四 实验结果
• 1 聚乙二醇化重组人生长激素免疫原性
• 2 聚乙二醇化重组人生长激素生物活性
• 3 聚乙二醇化重组人生长激素药代动力学
• 五 讨论
• 六 总结
• 七 参考文献
• 八 致谢
• 九 作者简介