论文题目: 犬冠状病毒的流行病学调查及地方株的特性研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 预防兽医学
作者: 王玉燕
导师: 陆承平
关键词: 犬冠状病毒,套式,基因,基因,基因重组,单克隆杭体,嵌合基因
文献来源: 南京农业大学
发表年度: 2005
论文摘要: 1.自2003年7月至2004年2月的8个月内收集犬粪样138份,其中家庭单养的腹泻犬粪样52份,犬场群养健康犬粪样81份,腹泻粪样5份。用可鉴定基因型的套式PCR方法检测犬冠状病毒(CCV)。结果显示,81份健康犬粪样中有70份检出Ⅱ型CC,各地的检出率差异不大,南京为80.0%(24/30),沈阳为87.2%(34/39),昆明为100%(12/12)。腹泻病犬CCVⅡ型阳性率南京为40.9%(18/43),上海77.8%(7/9),昆明60%(3/5)。各地均没有检测到典型的Ⅰ型CCV。取各地犬CCV阳性样本PCR产物各2份测序,结果表明,所得Ⅱ型CCV序列都与CCV1-71(96.5-99.5%)及来自中国大熊猫CCV(95.8-99.1%)的M基因序列有很高的同源性,与猪传染性胃肠炎冠状病毒(TGEV)的同源性(93.4-97.2%)高于Ⅰ型猫冠状病毒(FcoV)代表株UCD1(77.8-81.6%)和Ⅱ型FCoV代表株FIPV79-1683(75.9-79.7%)。一个来自昆明的CCV序列在系统进化树上处于Ⅰ和Ⅱ型CCV之间,可能是一个新的变异株。 2.用A72细胞从RT-nPCR检测阳性的腹泻犬粪样中分离CCV,经RT-nPCR和免疫荧光试验鉴定,成功分离到4株CCV野毒,分别命名为CCV KM、NJ2、NJ17、SH3。对CCV KM毒株进行了电镜观察,可见到与CCV参考毒株1-71相似的带“冠”的病毒粒子。细胞适应性试验表明,分离到的野毒在A72细胞上导致的CPE不同于参考毒株的合胞体病变,NJ2、KM株主要导致细胞圆缩、脱落,NJ2株的6-15代在A72细胞上有CPE,但是15代后不再出现CPE。NJ17、SH3在A72细胞上不产生明显的细胞病变(CPE)。参考株CCV1-71及野毒KM、NJ2(8代)都可在A72、MDCK、F81、CrFK等细胞上增殖,只有KM株可在Vero细胞上增殖,并可见明显CPE。交叉保护试验证明,抗KM的血清不能中和其他的CCV毒株,抗CCV1-71的血清可以中和野毒KM、NJ2但是不能中和另外的CCV野毒株HC、DF、HF,说明CCV不同毒株间的交叉保护性很有限。 3.蚀斑克隆纯化CCV1-71株,然后经蔗糖密度梯度离心提纯抗原,免疫BALB/C小鼠,小鼠脾脏与SP2/0细胞融合,用ELISA方法筛选到一株ELISA效价高的杂交瘤细胞株E1,用中和试验方法筛选到两株有中和抗体作用的杂交瘤细胞株N1、N2。ELISA阳性的杂交瘤细胞分泌抗体在细胞培养上清中的效价可达1:2048,小鼠腹水的效价为1:38768,两中和抗体分泌株的细胞培养上清中抗体的效价分别为1:40、1:80,小鼠腹水效价分别为1:20480、1:40960。单抗的特异性检测表明:免疫荧
论文目录:
中文摘要
英文摘要
前言
上篇 文献综述
第一章 犬冠状病毒的研究进展
第二章 犬冠状病毒的基因重组现象及重组机制假说
下篇 研究内容
第三章 犬粪样中冠状病毒的检测及基因型分析
1．材料与方法
2．结果
3．讨论
参考文献
第四章 犬冠状病毒的分离鉴定
1．材料与方法
2．结果
3．讨论
参考文献
第五章 犬冠状病毒单克隆抗体的制备
1．材料与方法
2．结果
3．讨论
参考文献
第六章 单克隆抗体对犬冠状病毒释放方式的展示及中和性单抗的ADE性质
1．材料与方法
2．结果
3．讨论
参考文献
第七章 犬冠状病毒M基因的同源重组分析
1．材料与方法
2．结果
3．讨论
参考文献
第八章 犬冠状病毒S基因的同源重组分析
1．材料与方法
2．结果
3．讨论
参考文献
第九章 犬冠状病毒与SARS-CoV嵌合S基因表达载体的构建及初步表达
1．材料与方法
2．结果
3．讨论
参考文献
全文总结
攻读学位期间发表文章目录
致谢
发布时间: 2005-07-19