不同浓度葡萄糖、胰岛素对HK-2细胞TGF-β1表达的影响

论文摘要

目的 观察不同浓度葡萄糖和胰岛素对HK-2细胞TGF-β1表达的影响及二者之间是否存在相互作用,以探讨葡萄糖、胰岛素经TGF-β1途径在糖尿病肾病（DN）肾间质纤维化中的作用。 方法 所有实验均在体外培养的HK-2细胞上进行。根据所用培养液含葡萄糖、胰岛素浓度的不同,实验所用细胞共分6组:A组（对照组）DMEM/F-12+5mmol/LD-葡萄糖+5uIU/mL胰岛素;B组DMEM/F-12+5mmol/L D-葡萄糖+125uIU/mL胰岛素;C组DMEM/F-12+25mmol/L D-葡萄糖+125uIU/mL胰岛素;D组DMEM/F-12+25mmol/LD-葡萄糖+1.25uIU/mL胰岛素;E组DMEM/F-12+25mmol/L D-葡萄糖;F组DMEM/F-12+125uIU/mL胰岛素,每种刺激条件设3个复孔,分别培养12h、24h、48h、72h,在各时间点收集培养液上清ELISA法测TGF-β1蛋白浓度,收集细胞计数后抽提总RNA,RT-PCR同时扩增TGF-β1和内参照GAPDH目的片段,琼脂糖凝胶电泳分离扩增产物,凝胶成像系统上扫描分析,计算TGF-β1mRNA相对表达量。整个实验过程在合适的时间重复一次。统计学分析采用t检验和单因素方差分析,显著性标准为P<0.05。 结果 所有标本均能检测到TGF-β1mRNA和TGF-β1蛋白的表达。（1）C组、D组（培养液中都含有25mmol/L D-葡萄糖）mRNA表达水平从干预12h即开始增加,24h达到峰值,且一直持续到试验结束。在干预24h C组、D组TGF-β1 mRNA的表达水平（0.8272±0.0325;0.8276±0.0239）明显高于A组（0.5288±0.0175）,差异有显著性（F=276.9;P=0.000）,而C组、D组之间差异无显著性（t=0.026 P=0.980）;B组TGF-β1 mRNA表达水平在各时间点与A组相比无明显差异,（干预24h为0.5438±0.0083对0.5288±0.0175 t=1.904 P=0.086）。（2）B组、C组（培养液中都含有125uIU/mL胰岛素）TGF-β1蛋白浓度在干预12h即开始增加,在24h达到高峰且一直持续到试验结束;而D组TGF-β1蛋白浓度与A组同时间点相比差别无显著性。干预24h B组、C组TGF-β1蛋白浓度（878.51±33.42;880.87±45.81）明显高于A组（286.04±9.21）,差异有显著性（F=640.7 P=0.000）;而D组（293.39±6.26）与A组相比无显著性差别（t=1.618 P=0.137）。（3）C组在高糖、高胰岛素作用下TGF-β1 mRNA水平和蛋白浓度均上调,但作用24h C组TGF-β1mRNA水平（0.8272±0.0325）与单纯高糖作用组E组相比（0.8286±0.0254）无差别（t=0.085P=0.934）,TGF-β1蛋白水平（880.87±45.81）与单纯高胰岛素作用组F组相比

论文目录

• 1 前言
• 2 材料与方法
• 2.1 实验仪器
• 2.2 实验试剂
• 2.3 实验方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 5 结论
• 6 附录
• 图片原始照片
• 缩略语的中英文对照
• 7 参考文献
• 8 攻读学位期间的研究成果
• 9 致谢
• 10 学位论文独创性声明、学位论文知识产权权属声明
• 11 文献综述