白英抗癌活性部位的筛选及抗肺癌A549机制的研究

论文摘要

目的:实验研究白英抗癌活性部位的筛选及对体内外癌细胞的增殖抑制、诱导凋亡及其可能作用机制,为开发和临床使用该中药治疗癌症提供实验数据。方法:白英全草干品提取药物活性部位C2,C3,D3,D5,D8;体外培养人肺癌A549、鼠H22肝癌细胞,采用MTT法筛选出两个最有效的活性部位作为加药组的药物;观察加药组人肺癌A549细胞形态变化;检测细胞凋亡率;电泳测定DNA梯状条带,半定量RT-PCR （reverse transcription-polymerase chain raction）检测bid、caspase-9mRNA表达的变化;建立Balb/c小鼠皮下H22肝癌细胞移植瘤模型,进行白英活性部位对Balb/c小鼠移植瘤作用的初步探讨,分5组瘤内给予白英C2,C3注射治疗7天,计算瘤体生长抑制率,肿瘤组织病理切片检查,用抗CD34多克隆抗体显示血管内皮细胞,对MVD （microvessel density）用免疫组化进行人工计数和定量分析。结果:白英活性部位对癌细胞增殖有较强的抑制作用,抑制效果依次是C3>C2>D8> D5>D3;药物组可见细胞核固缩、染色质凝集、边聚等特征,细胞凋亡率显著增高,电泳可见明显的DNA梯状条带,bid、caspase-9 mRNA表达上调,16只Balb/C小鼠可见皮下移植瘤出现,药物组小鼠瘤体生长缓慢,病理出现凝固性或液化性坏死改变, MVD人工计数均低于空白对照组。结论:白英活性部位C3,C2,D3,D5,D8对人肺癌A549细胞增殖均有较强的抑制作用,其中以C3部分的抑制作用最强。白英C2, C3活性部位不仅能通过上调人肺癌A549细胞中caspase-9和bid基因表达,诱导肺癌A549细胞凋亡,而且还能抑制Balb/C小鼠肿瘤血管生成,达到抗肿瘤的作用,且C3效果优于C2。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 第1章 前言
• 第2章 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 细胞株、小鼠
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 主要试剂的配制
• 2.1.4 主要仪器设备
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 细胞培养和实验分组
• 2.2.2 绘制肺癌A549 细胞生长曲线（MTT 法）
• 2.2.3 细胞毒实验（MTT 法）
• 2.2.4 流式细胞仪检测细胞凋亡率
• 2.2.5 DNA 琼脂糖凝胶电泳法检测DNA 梯形条带
• 2.2.6 RT-PCR 半定量检测bid 和caspase-9 凋亡相关基因
• 2.2.7 白英C3 ，C2给药量毒性实验与对Balb/c 小鼠移植瘤的作用
• 2.2.8 统计学处理
• 第3章 结果
• 3.1 A549 细胞的生长曲线
• 2,D₈部位对A549 细胞的抑制作用'>3.2 白英C₂,D₈部位对A549 细胞的抑制作用
• 3,D₃,D₅部位对A549 细胞的抑制作用'>3.3 白英C₃,D₃,D₅部位对A549 细胞的抑制作用
• 3,C₂,D₃,D₅,D₈部位作用A549 细胞的IC50 值'>3.4 白英C₃,C₂,D₃,D₅,D₈部位作用A549 细胞的IC50 值
• 2,C₃部位对A549 细胞凋亡的影响'>3.5 白英C₂,C₃部位对A549 细胞凋亡的影响
• 3,C₂给药量毒性实验与对Balb/c 小鼠移植瘤的作用'>3.6 白英C₃,C₂给药量毒性实验与对Balb/c 小鼠移植瘤的作用
• 第4章 讨论
• 第5章 结论
• 1.实验结果
• 2.结论
• 3.展望
• 致谢
• 参考文献
• 综述