整合素连接激酶及相关因子在肾间质纤维化大鼠模型中的表达及意义

论文摘要

目的:肾间质纤维化（RIF）是由多种原因引起的细胞外基质（ECM）在肾间质内过度沉积和间质成纤维细胞的增生而形成,是各种肾脏疾病进展到终末期的共同途径和主要病理基础。表达α-SMA的肌成纤维细胞（MyoF）是合成ECM的主要细胞,已有研究表明在RIF过程中约36%的MyoF是由小管上皮细胞转化而来,这过程称为小管上皮细胞转分化（EMT）。TGF-β1是公认的致纤维化因子,能通过多种信号传导途径诱导EMT的发生和发展。ILK是其信号传导途径的效应分子,介导了TGF-β1诱导肾小管EMT的各个关键步骤,最终导致肾间质纤维化的发生。本研究主要通过组织病理学观察、免疫组织化学和RT-PCR方法,了解ILK、α-SMA及TGF-β1在肾间质纤维化动物模型中的表达,探讨它们与肾间质纤维化形成的关系。方法:1.肾间质纤维化动物模型的建立:选取清洁级SD大鼠72只,随机分为三组:正常组、手术组、假手术组,手术组采用单侧输尿管结扎方法,建立肾间质纤维化模型,即UUO模型,手术组大鼠常规麻醉后在近左肾下极处游离并结扎左输尿管;假手术组大鼠仅行开腹术游离左输尿管;正常组不做任何处理。各组大鼠分别于术后1、3、7、14天处死,取其左肾,观察左肾大体形态,光镜下观察肾脏病理改变及间质纤维化程度。2.用免疫组织化学技术检测肾间质中的ILK和TGF-β1、α-SMA的表达情况,进一步分析各组之间ILK和TGF-β1、α-SMA表达量与肾间质损伤程度之间的关系,以及ILK和TGF-β1、α-SMA彼此之间的相关关系。3.用逆转录方法半定量测定ILKmRNA在UUO模型中的表达量,并分析其与肾间质损害程度的关系。结果:1.采用单侧输尿管结扎术构建肾间质纤维化动物模型成功,未见大鼠死亡。2.肾组织形态学改变:与对照组相、假手术组比,UUO组大鼠肾脏明显肿大,肾皮质变薄,肾盂积水,并随着时限的延长而加重。3.免疫组化分析显示:ILK在正常肾组织中几乎无阳性表达,UUO模型中,ILK主要表达在肾间质,随着肾间质病变程度加重,其阳性表达面积显著增加,各组之间表达有显著性差异（P<0.001）,与肾间质病变程度呈显著正相关关系（r=0.842,P<0.001）;TGF-β1在正常肾间质中仅有微量的表达,随着肾间质病变程度的加重表达逐渐增加,各组之间TGF-β1的表达有显著性差异（P<0.001）,和肾间质病变程度呈显著正相关关系（r=0.892,P<0.001） ;α-SMA在正常肾组织中,仅表达于血管平滑肌肌层,在肾小管上皮细胞胞浆有微量表达,随肾间质病变加重表达增强各组之间α-SMA的表达有显著性差异（P<0.001）,和肾间质病变程度之间有正相关关系（r=0.854,P<0.001）。结论:1.ILK作为TGF-β1的下游信号因子参与EMT,EMT可能是致肾间质纤维化的一个重要方式。2.TGF-β1可能在RIF的发生中起重要作用,EMT可能是TGF-β1致肾间质纤维化的一个重要途径。3.α-SMA作为MyoF的标志蛋白参与EMT,在肾间质纤维化发生中起重要作用。4.在各种病变程度的肾小管间质中,ILK和TGF-β1、α-SMA的表达有正相关关系,推测ILK可能在TGF-β1介导的EMT过程中起到重要的作用。

论文目录

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