利用免疫蛋白组学技术筛选和鉴定胃癌肿瘤相关抗原及血清肿瘤标记物

论文摘要

背景与目的:肿瘤相关抗原是潜在的肿瘤标志物,对肿瘤的早期筛选具有重要价值。因此,系统、全面地研究肿瘤相关抗原对于肿瘤标志物的筛选具有重要意义。本研究采用免疫蛋白组学技术（Immunoproteomics）筛选胃癌肿瘤相关抗原及血清肿瘤标记物。方法:取15例人胃癌组织,应用双向凝胶电泳（two-dimensional electrophoresis, 2-DE）技术对同一胃癌患者的胃癌组织（2份）、癌旁组织及远端正常胃粘膜组织的细胞总蛋白同时进行电泳后获得4张双向凝胶,其中一块2-DE凝胶是银染显色的胃癌组织细胞蛋白作为平行胶,其余三块2-DE凝胶经半干转印将凝胶中的蛋白质转至聚偏氟乙烯（polyvinylidene fluoride,PVDF）膜上,分别与胃癌患者的自身血清进行免疫印迹分析,建立2DE/Western blot反应图谱。经计算机图像分析识别差异反应的蛋白点,然后与平行胶比较确定相应的差异反应蛋白质点,采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry,MALDI-TOF MS）对相应的差异蛋白质点进行鉴定,筛选和鉴定胃癌相关肿瘤抗原。结果:1.获得了分辨率较高且匹配性较好的人胃癌组织总蛋白2-DE图谱,15块胶的平均点数为839±24,匹配点数为752±21,平均匹配率为89.6%。2.人胃癌组织、癌旁组织及远端正常胃粘膜组织分别与患者自身血清进行免疫印迹分析,获得分辨率较高的Western blotting反应图谱,图像分析共识别23个差异反应的蛋白质,在平行胶上找到了相应匹配的差异反应蛋白质点,质谱鉴定分析、鉴定出17个蛋白点,分别为锰超氧化物歧化酶（Manganese Superoxide Dismutase,MnSOD）、胆绿素还原酶B（biliverdin reductase B,BVR B）、α-烯醇酶及其异构体烯醇酶-1、6-磷酸葡萄糖酸内酯酶、中间丝波形蛋白异构体、核有丝分裂器蛋白1异构体、热休克蛋白27（heat shock protein 27,HSP27）、丝状肌动成帽蛋白α-1亚单位、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、核不均一核糖核蛋白A2/B1（Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein A2/B1,hnRNP A2/B1）、微管蛋白β5、纤维蛋白素原β-链前蛋白原、醛脱氢酶9A1、鸟苷酸结合蛋白β-2亚单位、抗体酶、平滑肌钙结合蛋白1。这些蛋白与细胞生长增殖、细胞代谢、细胞周期调控、信号转导等有关。结论:1.获得了分辨率较高且匹配性较好的人胃癌组织总蛋白2-DE图谱,2.首次应用人胃癌组织、胃癌癌旁组织及远端正常胃粘膜组织蛋白与胃癌患者自身血清反应获得了分辨率较高的2-DE/Western blot反应图谱。3.成功鉴定17个胃癌相关抗原,为进一步筛选用于胃癌诊断、治疗和预后评估的胃癌分子标志物奠定了坚实的基础。4.应用免疫蛋白组学技术对胃癌肿瘤相关抗原进行了初步筛选和鉴定,证实免疫蛋白组学技术是一种新的筛选肿瘤抗原和肿瘤标志物的良好方法。

论文目录

• 符号说明
• 中文摘要
• 英文摘要
• 论文正文：利用免疫蛋白质组学技术筛选和鉴定胃癌肿瘤相关抗原及血清肿瘤标志物
• 前言
• 技术路线
• 1 材料和方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 1.3 统计学处理
• 2 结果
• 2.1 胃癌组织标本 HE 染色
• 2.2 组织总蛋白浓度测定
• 2.3 胃癌总蛋白2-DE 凝胶图谱
• 2.4 胃癌肿瘤相关抗原的筛选结果
• 2.5 差异蛋白质点的MALDI-TOF MS 肽质指纹图分析结果
• 3 讨论
• 参考文献
• 全文总结
• 文献综述
• 致谢
• 攻读硕士期间发表的文章