论文摘要
NGAL（neutrophil gelatinase-associated lipocalin）基因的蛋白表达产物是1993年是由Kjeldsen等人在中性粒细胞中首先发现的。有关NGAL基因在各种组织中的表达及其生物学功能一度成为人们研究的热点。近来越来越多的研究表明，NGAL基因在肿瘤组织中不仅呈现高表达，而且还参与癌细胞的侵袭与不良分化。但是关于NGAL基因的表达调控机制目前尚不甚明了。针对于此，我们在肺癌细胞系中深入研究了NGAL基因的基础表达调控机制。这将有助于从分子水平上促进肺癌发生发展机制的研究；同时也会对研究NGAL基因在其它肿瘤细胞中的表达调控机制具有指导意义。研究内容和方法：1．运用免疫组织化学技术对肺腺癌、鳞癌、肺泡癌等23例肺癌组织切片中NGAL基因的表达情况进行检测分析。2．利用RT-PCR和免疫荧光的方法，分别在RNA和蛋白水平检测NGAL基因在肺癌细胞系95D和A549细胞中的表达情况。3．运用PCR缺失、突变及定点突变的方法构建一系列NGAL基因的荧光素酶报告基因表达载体，然后进行瞬时转染，检测在关键调控元件缺失或突变之后的相对荧光素酶活力，确定NGAL基因的核心启动子区。4．应用生物信息学方法预测与NGAL基因核心启动子区相互作用的潜在的转录因子。5．运用蛋白印迹技术检测NGAL基因的潜在的转录因子在上述两种肺癌细胞系中的表达情况。6．设计、合成寡核苷酸探针，利用凝胶滞留技术研究确定NGAL基因启动子区调控元件与肺癌细胞核蛋白的结合情况；利用凝胶超滞留技术研究确定肺癌细胞中与NGAL基因启动子区调控元件具有结合能力的转录因子。研究结果：1．免疫组化检测结果表明，肺癌组织中NGAL阳性着色的比例为82.61％（19／23）。肺腺癌、鳞癌组织细胞中可见NGAL中等强度的阳性着色分布于整个细胞胞浆。提示在肺癌组织中有NGAL基因的显著表达。2．RT-PCR和免疫荧光检测发现，在肺癌细胞系95D和A549细胞中存在着NGAL基因的表达。3．构建了一系列的NGAL基因的报告基因表达载体。检测结果表明，NGAL基因在肺癌细胞系中的核心启动子区为-152～-141，而-106～-79区间是NGAL基因的最小功能启动子区。4．生物信息学预测显示，与NGAL基因-152～-141区段相结合的转录因子可能是C／EBPs（CCAAT／enhancer binding proteins）家族成员；而与NGAL基因-106～-79区段相结合的可能是MRFs（Myogenic Regulatory Factors）家族成员。5．进一步的蛋白印迹技术检测发现，在肺癌细胞系中仅有上述两个家族中的C／EBPβ和MyoD、Myf5的表达。6．凝胶滞留实验发现，在肺癌细胞的核蛋白中确实存在着能够与NGAL基因调控序列相结合的成分。进一步的超滞留实验结果表明，与NGAL基因调控序列结合的转录因子分别是C／EBPβ和MyoD。结论：在肺癌细胞中，调控NGAL基因表达的核心启动子区以及最小功能启动子区分别位于其转录起始位点上游-152～-141和-106～-79区间。C／EBPβ和MyoD可能是调控NGAL基因基础表达的关键转录因子。NGAL基因在肺癌细胞中的表达调控特点与其它肿瘤细胞的明显不同，提示NGAL基因的表达调节存在细胞特异性。
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- [1].血、尿NGAL在2型糖尿病肾病进展各阶段的变化及其临床意义[J]. 心血管康复医学杂志 2020(01)
- [2].尿NGAL在微小病变型肾病并急性肾小管坏死中的诊断价值分析[J]. 医学理论与实践 2020(06)
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- [4].NGAL对脓毒症/脓毒性休克患者预后的预测作用[J]. 中华卫生应急电子杂志 2020(04)
- [5].NGAL在诊断原发性高血压患者中的临床意义分析[J]. 中国实验诊断学 2016(12)
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- [7].NGAL在食管癌中的表达及意义[J]. 中国医学创新 2011(26)
- [8].NGAL在新生儿急性肾损伤中的研究进展[J]. 当代医学 2020(24)
- [9].倍生颗粒对糖尿病肾病气阴两虚证的疗效及对血清NGAL的影响[J]. 云南中医中药杂志 2019(10)
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- [11].阿昔洛韦诱导的人肾小管上皮细胞NGAL、IL-18表达及其意义[J]. 中华全科医学 2014(12)
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- [13].NGAL作为急性肾损伤生物标志物的研究现况[J]. 医学综述 2016(06)
- [14].NGAL、hs-CRP检测对糖尿病肾病早期损伤的临床意义[J]. 齐齐哈尔医学院学报 2016(13)
- [15].尿NGAL在2型糖尿病肾病肾小管间质损伤评价中的价值[J]. 中华肾病研究电子杂志 2016(04)
- [16].紫癜性肾炎患儿血清及尿液中NGAL的检测及临床意义[J]. 黑龙江医药科学 2015(05)
- [17].原发性高血压患者NGAL表达水平及临床意义分析[J]. 国际检验医学杂志 2015(21)
- [18].血清及胆汁中NGAL对于区分良恶性胆道狭窄的临床意义[J]. 世界华人消化杂志 2014(01)
- [19].NGAL在乳腺癌中的表达及意义[J]. 中国实用医药 2011(20)
- [20].NGAL在诊断肝硬化患者急性肾功能损伤中的研究进展[J]. 国际检验医学杂志 2017(04)
- [21].NGAL在肝硬化继发急性肾损伤中的临床诊断价值分析[J]. 检验医学与临床 2016(22)
- [22].尿NGAL与妊高症肾损伤的相关分析[J]. 中国医药科学 2017(07)
- [23].急性肾损伤新的标志物NGAL的临床检测意义[J]. 中国实用医药 2011(30)
- [24].尿NGAL在儿童急性肾损伤诊断中的作用研究[J]. 中国中西医结合肾病杂志 2010(06)
- [25].NGAL在腹膜透析相关性腹膜炎诊断中的应用[J]. 安徽医科大学学报 2018(12)
- [26].原发性高血压患者尿NGAL水平检测对肾功能损害的早期诊断价值[J]. 山东医药 2017(17)
- [27].对比剂使用后尿NGAL水平变化对肾脏损伤的探讨[J]. 宁夏医学杂志 2015(12)
- [28].检测NGAL对成人肝移植术后急性肾损伤的早期诊断价值[J]. 武警医学 2016(05)
- [29].高血压肾病早期血尿NGAL水平的变化及临床意义[J]. 中国免疫学杂志 2014(12)
- [30].生物标记物NGAL实验室检测诊断急性肾损伤研究进展[J]. 国际检验医学杂志 2015(14)