靶向NF-κB p65亚基穿膜拮抗肽的分子设计及其抗炎功能鉴定

论文摘要

核因子-κB（NF-κB）,是一种普遍存在的转录因子,是多种信号转导途径的汇聚点,不仅参与介导了免疫应答、病毒复制、细胞凋亡和增殖的多种基因的表达调控,而且在调节炎症反应的基因中起关键作用。NF-κB可高效诱导多种细胞因子、粘附分子、趋化因子和急性期反应蛋白的基因表达,同时对参与炎症反应放大与延续（即级联瀑布效应）的多种酶的基因表达也具有重要的调控作用。自身免疫性疾病、变态反应、（类）风湿性关节炎、哮喘、牛皮癣、动脉粥样硬化、心肌再灌注损伤、肾小球性肾炎、机体对移植物的排异反应、炎性肠道疾病、恶病质、甲状腺疾病综合征、幽门螺杆菌相关性胃炎和某些神经性疾病等急慢性炎性相关疾病的发生或致病过程,均与NF-κB过度激活密切相关。因此,多数学者最近提出NF-κB是极具潜力的新型抗炎靶点。从理论上讲,如能有效拮抗NF-κB的活化,则可达到一定程度地缓解或/和治疗上述疾病目的。从NF-κB活化的信号通路来看,NF-κB与DNA顺式元件的结合是特异的,也是NF-κB启动相关炎症介质基因转录的必经之路。由p50/p65组成的异源二聚体是最经典的NF-κB二聚体,其在细胞中的含量以及与κB基序的亲合力均远远高于其它二聚体,在靶基因的转录调控中扮演着重要作用。如能对p50/p65异源二聚体与DNA顺式元件的结合（即NF-κB的DNA结合活性）实施直接的干预措施,将能达到高效特异抑制NF-κB生物学活性的目的。在与DNA顺式元件的结合过程中,p50和p65亚基均发挥着重要的作用。但值得注意的是,p50亚基之间可形成同源二聚体,同时因p50结构中不含有反式激活域,使得p50/p50同源二聚体虽然具有识别并结合κB序列的能力,但缺乏激活靶基因转录表达的能力。相反,p50/p50同源二聚体还可竞争性地抑制p50/p65异源二聚体的与κB序列的结合,对NF-κB调控靶基因的表达起负反馈调节作用。因此,以p65的DNA结合结构域为的靶点是筛选NF-κB抑制剂的最好选择。为此,先前我们在国家自然科学基金资助项目（30080009）的资助下,以p65亚基的DNA结合结构域为靶蛋白,利用酵母双杂交技术从随机肽库中筛选出6条能与p65 DNA结合结构域特异结合的多肽。但值得注意的是,酵母双杂交技术虽然可筛选获得

论文目录

• 英文缩略对照表
• 英文摘要
• 中文摘要
• 论文正文 靶向NF—κB p65 亚基穿膜拮抗肽的分子设计及其抗炎功能鉴定
• 前言
• 第一部分 生物信息学预测NF—κB p65 亚基结合肽与p65 间的相互作用及其理化性质
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 第二部分 NF—κB p65 亚基穿膜结合肽的构建、表达、纯化及其穿膜功能鉴定
• 实验一 NF—κB p65 亚基穿膜结合肽原核表达载体的构建
• 材料与方法
• 结果
• 实验二 NF—κB p65 亚基穿膜结合肽的表达与纯化
• 材料与方法
• 结果
• 实验三 NF—κB p65 亚基穿膜结合肽的穿膜功能鉴定
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 第三部分 NF—κB p65 亚基穿膜结合肽抗炎功能鉴定
• 实验一 Biosensor 检测p65 穿膜结合肽与p65 间的结合及其亲合力
• 材料与方法
• 结果
• 实验二 p65 穿膜结合肽对NF-κB DNA 结合活性的抑制作用
• 材料与方法
• 结果
• 实验三 p65 穿膜结合肽对NF—κB 转录活性的抑制作用
• 材料与方法
• 结果
• 实验四 p65 穿膜结合肽对炎症介质表达的抑制作用
• 材料与方法
• 结果
• 实验五 在体实验观察p65 穿膜结合肽的抗炎效应
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 小结
• 全文总结
• 致谢
• 参考文献
• 文献综述 NF—κB 研究进展
• 参考文献
• 博士期间发表的论文及成果